用于地中海貧血診斷的毛細(xì)管電泳和變性高效液相色譜方法的建立及評(píng)價(jià).pdf

1、1、在血清血水平利用毛細(xì)管電泳技術(shù)建立一種自動(dòng)化、高通量,精確的地中海貧血診斷方法,對(duì)等電聚焦毛細(xì)管電泳(capillaryisoelectric focusing,CIEF)檢測(cè)血紅蛋白A<,2>(Hb A<,2>)含量做出用于篩查地中海貧血(地貧)攜帶者的方法學(xué)評(píng)價(jià).2、建立一種快速、操作簡(jiǎn)單、自動(dòng)化的基于變性高效液相色譜技術(shù)并結(jié)合引物延伸技術(shù)(primer extension-denaturing high performance

2、liquid chromatography(PE-DHPLC))的針對(duì)中國(guó)人群最常見(jiàn)的5種β-地中海貧血(β-地貧)基因型的基因診斷新方法.方法1、收集105名健康成人、93例經(jīng)常規(guī)地貧篩查有陽(yáng)性表型的連續(xù)臨床樣品.通過(guò)正常人樣品分析比較CIEF測(cè)定HbA<.2>與HelenaSpife combo電泳系統(tǒng)結(jié)果的一致性;通過(guò)比較樣品內(nèi)和樣品間HbA<,2>的CIEF測(cè)定值的變異系數(shù)(CVs)評(píng)價(jià)該法的精確度和穩(wěn)定性;通過(guò)分析陽(yáng)性樣品的基

3、因型來(lái)評(píng)價(jià)CIEF檢測(cè)地貧的準(zhǔn)確性.2、依據(jù)人類β珠蛋白基因序列設(shè)計(jì)可擴(kuò)增包含目前已知中國(guó)人群所有β-地貧突變位點(diǎn)的引物.同時(shí),根據(jù)中國(guó)人群中5個(gè)最常見(jiàn)的β-地貧突變位點(diǎn)[CDs41-42(-TCTT),IVS-2-654(C>T),TATAbox-28(A>G),CD17(A>T)和CDs71-72(+A)]的位置及變性高效液相色譜在全變性條件下的分離特點(diǎn)設(shè)計(jì)5條延伸引物.利用PCR擴(kuò)增得到檢測(cè)靶序列片段,然后以純化的靶序列片段為模板