bFGF和Bax、Bcl-2及MMP-9在胎膜中的表達及與胎膜早破的關系.pdf

1、胎膜早破(premature rupture of the fetal membranes,PROM)是指胎膜在臨產(chǎn)前自發(fā)性破裂;足月胎膜早破(term premature rapture of the fetal membranes,tPROM)是指妊娠滿37周的胎膜早破;未足月胎膜早破(preterm premature ruptureof the fetal membranes,pPROM)是指妊娠不滿37足周的胎膜早破.在國內(nèi),

2、孕婦中tPROM的發(fā)生率約為10﹪,pPROM的發(fā)生率為2.0﹪～3.5﹪,其中約25﹪的pPROM發(fā)生在妊娠26周前.pPROM常合并早產(chǎn),30﹪～40﹪的早產(chǎn)與pPROM有關.目前,pPROM的處理是產(chǎn)科臨床工作中較為棘手的問題,臨床期待新的處理措施. 目前認為PROM是多因素共同作用的結果,但其具體病因和發(fā)病機制尚不清楚.研究顯示PROM除與感染有關外,無感染的PROM的發(fā)生還可能與胎膜自身的結構和生化改變密切相關.人的胎

3、膜是由羊膜、絨毛膜和富含膠原的細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)組成,而羊膜的結構完整性和ECM中膠原含量決定正常妊娠中胎膜的彈性和張力. 胎膜ECM中的膠原含量受基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑(tissue inhibitors of matrix metalloproteinases,TIMPs)的調(diào)控.MMPs是一類依賴鋅

4、離子而具催化活性的金屬蛋白酶家族的一個亞族,各成員間協(xié)同作用,幾乎能降解ECM中所有膠原成分;基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)是其中一種,主要降解Ⅳ型膠原,后者是基底膜的主要成分,因此MMP-9可能在PROM中起重要作用. 研究顯示PROM還可能與細胞凋亡(apoptosis)有關,其中促凋亡蛋白Bax(Bcl-2 associated X protein,Bax)和抗凋亡蛋

5、白Bcl-2(B cell lymphoma/leukemia-2 protein,Bcl-2)介導的線粒體途徑在胎膜早破中的作用是爭議的焦點,有待進一步研究.Bax、Bcl-2分別是Bcl-2家族中最具代表性的促凋亡和抗凋亡蛋白,兩者結構相似、作用相反,并且Bax是Bcl-2活性的主要調(diào)控因子,Bax/Bcl-2比值是決定細胞是否發(fā)生凋亡的關鍵. 堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth fact

6、or,bFGF)是一種能刺激中胚層、神經(jīng)外胚層源的多種細胞增殖和分化的多肽類生長因子,有調(diào)節(jié)細胞凋亡,促進細胞分裂、增殖和生長的作用.有研究者發(fā)現(xiàn)bFGF能促進體外羊膜上皮細胞的增殖和移行,但胎膜早破患者胎膜組織上bFGF的表達情況有待研究. 本實驗通過研究bFGF和Bax、Bcl-2及MMP-9在PROM患者胎膜組織上的表達情況及相關關系,進一步探討四因子在胎膜早破發(fā)病過程中的病理生理機制,為胎膜早破臨床處理開辟新的治療思路和

7、治療途徑提供必要的理論依據(jù). 材料與方法 1-材料隨機選取2005年10月至2006年6月期間于鄭州大學第三附屬醫(yī)院住院分娩的孕32-40周的單胎頭位胎膜早破初產(chǎn)婦36例,根據(jù)破膜發(fā)生時孕周的大小分為:pPROM組:16例,孕婦平均年齡為(27.8±2.86)歲,平均孕周為(34.9±1.47)周,tPROM組:20例,孕婦平均年齡為(28.1±2.91)歲,平均孕周為(38.9±1.05)周;pPROM組和tPROM組

8、通過胎膜組織HE染色觀察亞臨床感染(即患者無臨床感染征象但患者胎膜在病理學診斷上存在絨毛膜羊膜炎)情況又分為亞臨床感染組和未感染組;同時選取同期孕37-40周的單胎頭位正常初產(chǎn)婦20例作為正常對照組:孕婦平均年齡(28.2±2.86)歲,平均孕周(38.8±0.94)周.所有受試對象按樂杰主編《婦產(chǎn)科學》第6版診斷標準,并均要求剖宮產(chǎn)終止妊娠,術前均未受產(chǎn)程影響,均未應用抗生素,均無臨床感染征象,均無母體疾病、無其他產(chǎn)科并發(fā)癥及胎兒、胎

9、位異常.胎盤娩出后立即無菌條件下取胎膜破口處周圍胎膜組織四塊及距破口約10cm處胎膜組織一塊,面積均約1×1cm<'2>,無菌生理鹽水沖洗、甲醛固定、石蠟包埋、2μm切片6張備普通HE染色和免疫組化染色.2.方法通過HE染色觀察胎膜亞臨床感染情況和免疫組化染色SP法研究bFGF與Bax、Bcl-2及MMP-9在胎膜組織中的表達情況,結果經(jīng)BiosensDigital Imaging System軟件進行圖像灰度值分析,用SPSS10.0

10、軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理,所得數(shù)據(jù)用(x±s)表示,組間比較采用單因素方差分析,相關關系采用直線相關分析,樣本率的比較采用卡方檢驗,以α=0.05作為檢驗水準. 結果1胎膜HE染色組織學觀察結果: 1.1組織學變化: 正常對照組:胎膜組織厚度均勻,完整性好,羊膜和絨毛膜連接緊密,膠原纖維均勻,排列整齊,少見炎細胞浸潤,但可見絨毛膜灶狀壞死. PROM組:破口和非破口處胎膜組織變薄,組織完整性差,羊膜和絨毛

11、膜層間分離,羊膜上皮細胞缺失多,連續(xù)性中斷,成纖維細胞少,膠原纖維疏松,排列扭曲、紊亂,可見不同程度的炎性細胞浸潤,除散在的凋亡細胞外,還可見絨毛膜細胞存在片灶狀脫落壞死:亞臨床感染的胎膜組織炎細胞浸潤以中性粒細胞為主,輕度感染者,少數(shù)炎細胞散布于基底膜和絨毛細胞中間,而羊膜層少見有炎細胞浸潤,中重度感染者,大量炎細胞帶狀密集浸潤絨毛膜近基底膜處,并散布于網(wǎng)狀層,在羊膜層,炎細胞主要浸潤成纖維細胞層外緣. 1.2亞臨床感染率:

12、 pPROM組16例患者中7例合并亞臨床感染,其發(fā)生率約為43.75﹪,其中中重度絨毛膜羊膜炎2例約占12.5﹪,輕度5例約占31.25﹪;tPROM組20例患者中7例合并亞臨床感染,其發(fā)生率約為30﹪,中重度絨毛膜羊膜炎1例約占5﹪,輕度5例約占25﹪;所有PROM患者的亞臨床感染率約為36.11﹪.2免疫組織化學結果: 2.1 Bax在胎膜羊膜上皮細胞、成纖維細胞和絨毛膜細胞的胞漿中表達.Bax在pPROM感染組和tP

13、ROM感染組的表達水平分別高于pPROM未感染組和tPROM未感染組,差異均有顯著性統(tǒng)計學意義(P<0.05),四組與對照組比較,Bax表達水平均增高,差異有顯著性統(tǒng)計學意義(P<0.05);胎膜早破各組破口處與相應非破口處比較,差異均無統(tǒng)計意學義(P>0.05). 2.2 Bcl-2也表達于胎膜羊膜細胞、成纖維細胞和絨毛膜細胞的胞漿中.Bcl-2的表達水平在pPROM感染組和未感染組、tPROM感染組和未感染組組間比較及四組與

14、正常對照組比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05);胎膜早破各組破口處與相應非破口處比較,差異也無統(tǒng)計學意義(P>0.05). 2.3 Bax/Bcl-2比值在pPROM感染組和tPROM感染組分別高于pPROM未感染組和tPROM未感染組,差異均有顯著性統(tǒng)計學意義(P<0.05),四組與對照組比較,比值均增高,差異有顯著性統(tǒng)計學意義(P<0.05);胎膜早破各組破口處與相應非破口處比較,差異均無統(tǒng)計意學義(P>0.05).

15、 2.4 MMP-9在淋巴細胞、中性粒細胞等炎性細胞的胞漿、成纖維細胞胞漿中高表達,在羊膜基底膜和成纖維細胞層呈明顯的褐色條帶分布,而在羊膜上皮細胞、絨毛膜細胞中無表達.MMP-9在pPROM感染組和tPROM感染組中的表達水平高于pPROM未感染組和tPROM未感染組,差異均有顯著性統(tǒng)計學意義(P<0.05),四組與對照組比較,差異也均有顯著性統(tǒng)計學意義(P<0.05);胎膜早破各組破口處與相應非破口處比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P

16、>0.05).2.5 bFGF廣泛表達于羊膜上皮細胞、成纖維細胞和絨毛膜細胞的胞漿中,在羊膜上皮細胞層和成纖維細胞層呈明顯的褐色條帶分布,并在中性粒細胞、淋巴細胞等炎性細胞胞漿中強表達.bFGF在pPROM感染組和tPROM感染組的表達水平高于pPROM未感染組和tPROM未感染組,差異均有顯著性統(tǒng)計學意義(P<0.05),四組與對照組比較,差異也均有顯著性統(tǒng)計學意義(P<0.05);胎膜早破各組破口處與相應非破口處比較,差異均無統(tǒng)計學

17、意義(P>0.05). 3 相關性分析: 3.1 Bax與MMP-9在PROM胎膜組織上的表達呈顯著正相關,相關系數(shù)r=0.878,P<0.01. 3.2 bFGF與Bax和MMP-9在PROM胎膜組織上的表達均呈顯著正相關,相關系數(shù)分別為r=0.904,P<0.01和r=0.885,P<0.01. 結論 1、Bax在PROM患者胎膜組織中高表達,Bc1-2表達未見明顯變化,Bax/Bc1-2比值