胎膜早破孕婦胎膜組織不同區(qū)域PGRMC1、MMP-9的表達(dá)及意義.pdf

1、胎膜早破（PROM）是指：臨產(chǎn)前發(fā)生胎膜破裂，發(fā)生率國(guó)內(nèi)2.7％~7%，國(guó)外報(bào)道5%~15%，分為未足月胎膜早破（pPROM<37W）和足月胎膜早破（tPROM≧37W）。未足月胎膜早破是指在妊娠20周以后，未滿(mǎn)37周胎膜在臨產(chǎn)前發(fā)生的胎膜破裂，發(fā)生率為2.0%~3.5%；足月胎膜早破是指妊娠滿(mǎn)37周后的胎膜破裂，發(fā)生率約為10%。胎膜早破可引起胎盤(pán)早剝、臍帶脫垂、早產(chǎn)、產(chǎn)后出血、羊水減少、羊水栓塞、胎兒窘迫、宮內(nèi)感染，尤其是未足月胎膜

2、早破易導(dǎo)致新生兒肺透明膜病、新生兒肺炎、敗血癥等，明顯地增加了圍產(chǎn)期母嬰發(fā)病率及病死率，是圍產(chǎn)期嚴(yán)重的并發(fā)癥之一。盡管胎膜破裂的機(jī)制仍然不清，但國(guó)內(nèi)外學(xué)者普遍認(rèn)為胎膜破裂依賴(lài)于機(jī)械拉伸、細(xì)胞外基質(zhì)組成成份的不平衡及凋亡的增加，其中細(xì)胞凋亡和細(xì)胞外基質(zhì)降解是其主要特征，因此對(duì)于進(jìn)一步探索胎膜早破的發(fā)病機(jī)制至關(guān)重要。
　　有文獻(xiàn)報(bào)道孕酮受體膜組件1（PGRMC1）可以調(diào)控MMP-9的表達(dá)和凋亡的發(fā)生。雖然關(guān)于胎膜早破的研究眾多，但大多

3、學(xué)者也僅限于隨意取材、單區(qū)域取材，對(duì)胎膜組織不同區(qū)域分別取材并進(jìn)行研究的文獻(xiàn)少之又少。但有研究發(fā)現(xiàn)胎膜局部微環(huán)境的改變能夠影響膠原纖維的降解及彈力纖維的產(chǎn)生，病理學(xué)研究揭示胎膜早破胎膜破裂區(qū)厚度下降35%；也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)某些因子在胎膜破裂區(qū)[RS]與遠(yuǎn)離破膜區(qū)[DS]的表達(dá)是不一致的；王麗等也發(fā)現(xiàn)某些因子在孕婦外周血，臍血，羊水，胎膜組織中的表達(dá)并不是完全一致的?；谝陨嫌^(guān)點(diǎn)，推測(cè)胎膜早破可能是先由局部微環(huán)境的改變及局部一些細(xì)胞因子表達(dá)的

4、改變，進(jìn)而導(dǎo)致此區(qū)域胎膜組分及厚度的改變，最后導(dǎo)致此區(qū)胎膜破裂的一個(gè)過(guò)程。因此本研究欲通過(guò)探索不同孕婦組不同區(qū)域胎膜組織中 MMP-9和PGRMC1的表達(dá)情況，進(jìn)而明確 MMP-9和PGRMC1的表達(dá)與胎膜早破發(fā)生的關(guān)系。
　　目的:通過(guò)探索孕婦胎膜組織不同區(qū)域（胎膜破裂區(qū)[RS]及遠(yuǎn)離破膜區(qū)[DS]）中PGRMC1和MMP-9的表達(dá)差異，進(jìn)而明確PGRMC1和MMP-9的表達(dá)與胎膜早破發(fā)生的關(guān)系及其在胎膜早破中的可能的發(fā)病機(jī)制。

5、
　　資料與方法:
　　1.研究對(duì)象：選擇2014年7月至2014年11月在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩的單胎孕婦80例，分兩組：
　?。?）胎膜早破組：40例單胎胎膜早破孕婦（PROM），孕周均為24-40周，其中8例為剖宮產(chǎn)，31例為陰道分娩（產(chǎn)程最長(zhǎng)不超過(guò)14.5小時(shí)）。所有足月胎膜早破孕婦均于破膜后3天內(nèi)結(jié)束分娩，未足月胎膜早破孕婦最長(zhǎng)于破膜后2周內(nèi)結(jié)束分娩。所有孕婦均無(wú)任何臨床感染癥狀（體溫小于38℃），

6、排除因羊水過(guò)多、機(jī)械性刺激引起的胎膜早破、雙胎、宮頸內(nèi)口松弛、妊娠合并子宮畸形、妊娠合并子宮肌瘤等妊娠期并發(fā)癥。
　?。?）對(duì)照組：40例單胎胎膜完整擇期剖宮產(chǎn)孕婦（其中部分為無(wú)宮縮因前置胎盤(pán)剖宮產(chǎn)孕婦，部分為因頭盆不稱(chēng)、臀位剖宮產(chǎn)孕婦）作為對(duì)照組，孕周24-40周，對(duì)照組術(shù)前均未進(jìn)入產(chǎn)程，且排除羊水過(guò)多及宮頸發(fā)育不全。
　　2.研究方法
　　(1)組織的收集與保存：分娩后20分鐘內(nèi)收集每位孕婦的破裂區(qū)胎膜[RS]及遠(yuǎn)

7、離破裂區(qū)的胎膜[DS]組織各2份。于胎膜破裂處取約長(zhǎng)2cm×寬2cm的胎膜組織作為破裂區(qū)胎膜；于胎盤(pán)邊緣取約長(zhǎng)2cm×寬2cm的胎膜組織作為遠(yuǎn)離破裂區(qū)的胎膜。
　　(2)采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)胎膜組織不同區(qū)域中PGRMC1和MMP-9的表達(dá)進(jìn)行定位及半定量。
　　(3)采用Real-time PCR法、Western blot方法檢測(cè)以上兩組胎膜破裂區(qū)[RS]，遠(yuǎn)離破膜區(qū)[DS]中PGRMC1和MMP-9的mRNA及蛋白的表

8、達(dá)水平。
　　(4)采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用Fisher確切概率法；計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)用于組間比較，以a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果:
　　1.兩組孕婦一般臨床資料的比較：兩組孕婦的年齡、孕周、體重指數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果示
　　(1) PGRMC1主要在絨毛膜層和蛻膜層表達(dá)，且主要于細(xì)胞核及部分細(xì)胞質(zhì)中

9、表達(dá)；四個(gè)區(qū)域的胎膜組織中，PGRMC1在胎膜早破組的胎膜破裂區(qū)著色最淺，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　(2) MMP-9主要在絨毛膜層和蛻膜層表達(dá)，且主要于細(xì)胞質(zhì)及部分細(xì)胞核中表達(dá)；四個(gè)區(qū)域的胎膜組織中，MMP-9在胎膜早破組的胎膜破裂區(qū)著色最深，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　3. PGRMC1蛋白在兩組間不同區(qū)域中的表達(dá)水平的比較
　　(1)與胎膜早破組的遠(yuǎn)離破膜區(qū)（1.045±0.098）相比，PGRMC1在胎膜早破組的胎膜破裂

10、區(qū)中（0.607±0.069）表達(dá)水平低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PGRMC1在對(duì)照組的胎膜破裂區(qū)（1.053±0.094）及遠(yuǎn)離破膜區(qū)（1.041±0.094）的表達(dá)差異是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的；
　　(2)與對(duì)照組的胎膜破裂區(qū)（1.053±0.094）相比，PGRMC1在胎膜早破組的胎膜破裂區(qū)（0.607±0.069）的表達(dá)較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩組間的遠(yuǎn)離破膜區(qū)相比，PGRMC1在胎膜早破組（1.045±0.098）及對(duì)照組（1.041

11、±0.094）的遠(yuǎn)離破膜區(qū)表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　4. MMP-9蛋白在兩組間四個(gè)不同區(qū)域中的表達(dá)水平的比較
　　(1)與胎膜早破組的遠(yuǎn)離破膜區(qū)（1.009±0.064）相比，MMP-9在胎膜早破組的胎膜破裂區(qū)中（1.450±0.122）表達(dá)水平較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MMP-9在對(duì)照組的胎膜破裂區(qū)（1.041±0.076）及遠(yuǎn)離破膜區(qū)（1.011±0.074）的表達(dá)差異是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　(2)與對(duì)照組的胎膜破

12、裂區(qū)（1.041±0.076）相比，MMP-9在胎膜早破組的胎膜破裂區(qū)（1.450±0.122）的表達(dá)較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩組間的遠(yuǎn)離破膜區(qū)相比，MMP-9在胎膜早破組（1.009±0.064）及對(duì)照組（1.011±0.074）的遠(yuǎn)離破膜區(qū)表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　5. PGRMC1在兩組間不同區(qū)域中的mRNA表達(dá)水平的比較
　　(1)與胎膜早破組的遠(yuǎn)離破膜區(qū)（0.903±0.004）相比，PGRMC1在胎膜早破組的胎

13、膜破裂區(qū)中（0.635±0.020）表達(dá)水平低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PGRMC1在對(duì)照組的胎膜破裂區(qū)（0.926±0.020）及遠(yuǎn)離破膜區(qū)（0.962±0.030）的表達(dá)差異是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　(2)與對(duì)照組的胎膜破裂區(qū)（0.926±0.020）相比，PGRMC1在胎膜早破組的胎膜破裂區(qū)（0.635±0.020）的表達(dá)較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩組間的遠(yuǎn)離破膜區(qū)相比，PGRMC1在胎膜早破組（0.903±0.004）及對(duì)照組（0.9

14、62±0.030）的遠(yuǎn)離破膜區(qū)表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　6. MMP-9在兩組間四個(gè)不同區(qū)域中的mRNA表達(dá)水平的比較
　　(1)與胎膜早破組的遠(yuǎn)離破膜區(qū)（0.919±0.011）相比，MMP-9在胎膜早破組的胎膜破裂區(qū)中（1.809±0.046）表達(dá)水平較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MMP-9在對(duì)照組的胎膜破裂區(qū)（1.003±0.021）及遠(yuǎn)離破膜區(qū)（0.952±0.013）的表達(dá)差異是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的；
　　(2)與對(duì)照