成人喉乳頭狀瘤Pin1和CyclinD1的表達及意義.pdf

1、目的: 喉乳頭狀瘤是一種喉部良性腫瘤。成人型喉乳頭狀瘤單發(fā)多見、多次復發(fā)后易惡變，屬喉癌前疾病之一，其惡變率較高。受病理取材部位、病理醫(yī)師經驗差異影響，對其惡變的早期診斷不理想。惡性腫瘤的形成是一個多因素、多步驟作用的細胞異常增生的過程。蛋白質序列中絲氨酸/蘇氨酸-脯氨酸鍵的磷酸化是控制細胞周期循環(huán)、調節(jié)細胞增殖和轉化的關鍵信號轉導機制之一。Pin1是多肽基脯氨酰順反同分異構酶家族成員之一，主要調節(jié)有絲分裂相關蛋白酶，對細胞周期

2、運行起著非常重要的調節(jié)作用。 Pin1專一性識別并順/反異構已磷酸化的絲氨酸/蘇氨酸-脯氨酸蛋白質，這種順反構型轉變直接影響蛋白質功能活性。CyclinD1是Ras信號轉導通路上的關鍵分子，Pin1過表達可以使CyclinD1在細胞核內異常蓄積，導致細胞異常增殖。研究發(fā)現，在多種人類惡性腫瘤中Pin1和CyclinD1過表達，可見其在腫瘤的形成過程中發(fā)揮了重要作用．研究成人喉乳頭狀瘤及其惡變組織中Pin1和CyclinD1的表達

3、對了解成人喉乳頭狀瘤惡變的發(fā)生和發(fā)展具有重要意義。為此，本研究檢測了成人喉乳頭狀瘤中Pin1和CyclinD1的表達情況，分析了二者之間的相關性，探討二者在喉乳頭狀瘤惡變中的作用，為喉乳頭狀瘤惡變早期診斷提供依據。 方法: 1、實驗材料 收集中國醫(yī)科大學盛京醫(yī)院耳鼻喉科自1989年4月至2007年3月間手術和活檢的成人喉乳頭狀瘤病例39例，喉乳頭狀瘤伴中、重度不典型增生(伴不典型增生組)27例，喉乳頭狀瘤伴癌變(

4、惡變組)16例標本，共計82例，作為實驗組。收集喉癌患者喉全切除術癌旁2cm正常組織10例作為對照組。 2、染色方法 正常喉組織標本經4％福爾馬林固定，常規(guī)脫水后石蠟包埋。所有蠟塊連續(xù)切片，每張切片4微米厚，一張HE染色核實診斷。采用免疫組織化學方法(S-P)染色，具體步驟按說明書。以PBS代替一抗的切片為陰性對照。 3、結果判斷 Pin1判斷的參考標準：Pin1在正常組織不表達或弱表達于胞核，過度表達時

5、胞核胞漿均著色。(A)陽性細胞染色強度分為：無染色為0分；細胞內可見淡黃色顆粒，為1分；見棕黃色為2分；棕褐色或棕紅色為3分。(B)500個細胞染色陽性細胞數分級：陽性細胞率0％為0分；1％-33％為1分；34％-66％為2分；≥67％為3分。AxB≤2分者為陰性，≥3分者為陽性表達。Cyclin D1的結果判斷參考何國慶標準：以腫瘤細胞核出現淡黃色或棕黃色顆粒為陽性細胞，每片隨機觀察5個視野，取均值，陽性細胞率>10％為陽性。

6、 4、統計學分析方法 應用SPSS11.0版統計軟件進行數據處理，采用x2檢驗、Fisher確切概率法、Spearman秩相關分析Pinl和Cyclin D1在各組中的表達關系及二者的相關性。P<0.05或P<0.0125為有統計學意義。 結果: 1、Pin1在正常組和病變組中的表達情況 Pin 1在喉正常鱗狀上皮組織中不顯色或僅有微弱顯色(0/10)；在各病變組中過表達，染色定位于胞核及胞漿。在12.8

7、2％(5/39)的喉乳頭狀瘤組、40.74％(11/27)的伴不典型增生組和81.25％(13/16)的惡變組中顯示陽性表達。正常組與病變組的Pin1表達經Fisher確切概率檢驗具有統計學意義；經多樣本率x2檢驗三組中Pin1蛋白表達陽性率不全相等，經x2分割法檢驗各組之間差異有顯著性。 2、Cyclin D1在正常組和病變組中的表達情況 Cyclin D1在喉正常鱗狀上皮組織中不表達(0/10)；在各病變組中過表達，

8、染色定位于胞核和胞漿。其中17.95％(7/39)的喉乳頭狀瘤組、33.33％(9/27)的伴不典型增生組及75％(12/16)的惡變組呈陽性表達。正常組與病變組的Cyclin D1表達經Fisher確切概率檢驗具有統計學意義；經多樣本率x2檢驗喉乳頭狀瘤組、伴中重度不典型增生組、惡變組織中Cyclin D1蛋白表達陽性率不相等；經x2分割法檢驗喉乳頭狀瘤組與伴不典型增生組之間表達無顯著性差異，其余各組之間差異有顯著性。 3、P

9、in1和Cyclin D1表達的相關性 在Cyclin D1陽性表達的7例喉乳頭狀瘤組織中，有4例Pin1陽性表達。經spearman秩相關檢驗兩者在喉乳頭狀瘤組的表達呈顯著正相關。將伴不典型增生組和惡變組合并。在Pin1陽性表達的24例兩組中有17例Cyclin D1陽性表達。 結論: 1、Pin1署CyclinD1在成人喉乳頭狀瘤、喉乳頭狀瘤伴中重不典型增生、喉乳頭狀瘤惡變組織中表達逐漸增強，可能在喉乳頭狀瘤