SiRNA沉默酸性鞘磷脂酶基因?qū)V期卵子凋亡的保護(hù)作用研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文SiRNA沉默酸性鞘磷脂酶基因?qū)V期卵子凋亡的保護(hù)作用研究姓名：馬蕓申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：陳系古20070608中出大學(xué)博七學(xué)位論文SiRNA沉默酸性鞘磷脂酶基岡中文摘要絲裂霉素誘導(dǎo)NIH3T3細(xì)胞的凋亡與鞘磷脂通路有關(guān)。免疫熒光示SMPDl分布于GV期隳子至囊胚細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中。靶向smpdl的siRNA娃微注射到Gv卵子的胞漿中后，SMPDl蛋自水平隨注射時聞而下降，24hSMPD

2、l蛋白下降約90％。暴露予表阿霉素(EPI)40h后出現(xiàn)胞漿碎裂等退化表型。與來注射和注射陰性對照及緩沖液的卵子相比，注射smpdlsiRNA的卵子細(xì)胞內(nèi)EPI蓄積明顯少于對照GV卵。AnnexinV／PI／Hoechst33342染色和單綴胞凝膠電泳(彗星實(shí)驗(yàn))方法發(fā)現(xiàn)注射siRNA可以對抗EPI產(chǎn)生的損傷作用，與smpdl基因敲除實(shí)驗(yàn)的結(jié)果～致。l結(jié)論1：靶彝Smpdl基因的siRNA沉默酸性鞘磷臘酶基因在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系NIH

3、3T3和GV期卵子中具有一定對抗化療藥物絲裂霉素和表阿霉素誘導(dǎo)凋亡的作用。SmpdlsiRNA可能成為對抗卵子化療中凋亡的新方法。l關(guān)鍵詞l：酸性鞘磷脂酶，小干擾孩糖核酸，生發(fā)泡期卵母細(xì)胞，凋亡第二部分肺癌分子病理分期研究曩的：即使是努科手術(shù)療效較好的沿期非小細(xì)胞肺癌病人，5年生存率僅在70％左右，即約30％的病人在5年內(nèi)死亡。目前的分期系統(tǒng)無法發(fā)現(xiàn)此類高危病人。本研究試圖利用多個分子標(biāo)記物組合來個體化預(yù)測IB期非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后。方法

4、：對148例lB期非小細(xì)胞肺癌的癌組織進(jìn)行了33種分子標(biāo)記物的檢測。然后利用其中73例病人的I窿床病理特征及預(yù)后資料，結(jié)合33種分子標(biāo)記物的表達(dá)狀態(tài)，用支持向量機(jī)方法篩選構(gòu)建三種IB期非小細(xì)胞肺癌個體化預(yù)后預(yù)測模型。最后利用剩余的75例病人對以上三種模型進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果：構(gòu)建了三種基于免疫組化和支持向量桃的lB期小細(xì)胞肺癌個體化預(yù)后預(yù)測模型，包括SVMl，SVM2和SVM3。SVMl由病人年齡、病理類型和5種分子標(biāo)記物(CD34MVD、

5、EMA、p21ras、p21WAFl和TIMP2)構(gòu)成。SVM2壺病人年齡、病理類型和19種分子標(biāo)記物(BCL2、caspase9、CD34MVD、lowmolecularweightcytokeratin、high—molecularweightcytokemtin、cyclooxygenase一2，EMA，HER2，MMP一2，MMP一9，p16、p21ras，p21WAFl、p27kipI、p53、TIMP1、TIMP2、VEGF

6、和13一catenin)構(gòu)成。SVM3則由SVMl和SVM2組合麗成。單因素和多因素分析證明對于根治術(shù)后的lB期非小細(xì)胞肺癌，這三種SVM模型是獨(dú)立的預(yù)后因子，并迸一步在75例IB期非小細(xì)胞肺癌進(jìn)行了個體化預(yù)后預(yù)測驗(yàn)證。SVMl將全組148例病人分為高風(fēng)險組4l例vs。低風(fēng)險組107例，高風(fēng)險組l、3、5年總的累計(jì)生存率分別是65。9％、220％和7。3％，低風(fēng)險組l、3、5年總的累計(jì)生存率分別是953％、897％和887％。SVMl將