PTHrP在人胃粘膜ECL細胞中表達的研究.pdf

1、骨質疏松癥是一種全身骨量減少、骨組織顯微結構改變伴有骨脆性增高及易導致骨折的增齡性疾病，它與年齡、性別、飲酒、雌激素缺乏、長期使用糖皮質激素等多種因素有關。許多消化系統(tǒng)疾病如胃切除術、慢性肝病、炎癥性腸病等有較高的骨質疏松發(fā)生率[1]，但目前對這些疾病引起骨質疏松的機理尚不明確。 胃切除術后骨病早在50多年前就被提出。多年研究已證實，飲食中鈣、維生素D的攝入、利用減少及胃酸分泌的減少都不是導致胃切除術后骨量丟失的主要原因[2-3

2、]。通過對分別實行胃大部切除（GX），胃底切除（FX，切除胃的泌酸部分）和胃竇切除術（切除胃泌素產生部位）的實驗對象所引起的骨量的變化程度比較時，發(fā)現切除胃底后能引起明顯的骨量減少[4-5]，在對其進一步的研究中，人們認為對骨代謝起主要作用的物質存在于胃底泌酸粘膜中的腸嗜鉻樣細胞（enterochromaffin-like cell，ECL cell）中，ECL細胞是泌酸粘膜部分最主要的內分泌細胞，占65-70%，富含顆粒和分泌囊泡[6

3、]，胃泌素（gastrin）是由胃竇部的G細胞分泌的一種激素，在ECL細胞成熟過程中起了重要的作用，在胃泌素的刺激下ECL細胞增生、肥大，分泌組胺、胰抑素、Reg蛋白等[7]，這種假想的物質同樣也受胃泌素的影響，人們認為胃泌素就是通過刺激這種假想激素的分泌來間接發(fā)揮降低血鈣濃度和刺激鈣吸收入骨的作用。人們將這種假想的物質暫命名為胃鈣素（Gastrocalcin），胃鈣素是一種可被肽鏈端解酶所降解的并且與組胺和胰抑素無關的肽類物質，這種激

4、素主要通過促進三磷酸肌醇的生成而發(fā)揮升高成骨樣細胞內鈣濃度的作用，將富含ECL細胞顆粒和分泌囊泡的胃粘膜提取物作用于3種成骨樣細胞株時，發(fā)現這種提取物能激活磷脂酶C并促進三磷酸肌醇生成，進而引起成骨樣細胞內鈣濃度迅速增高[8-9]。 2005年，Andersson[10]等學者對大鼠的ECL細胞進行了全基因圖譜的繪制，發(fā)現在受胃泌素調節(jié)的14種基因中有10種具有分泌活性，其中之一為甲狀旁腺激素相關蛋白（Parathyroid H

5、ormone-related Protein/Parathyroid Hormone-like Hormone，PTHrP或PTHLH）基因。 PTHrP是在研究惡性腫瘤引起的體液性惡性高鈣血癥機制過程中發(fā)現的一種多肽類物質，目前多項研究已證實PTHrP可廣泛表達于體內多種正常組織和細胞中，如循環(huán)系統(tǒng)、內分泌細胞及平滑肌細胞中等，在機體成長成熟過程中它發(fā)揮了重要的作用[11]。由于PTHrP的mRNA極不穩(wěn)定，蛋白本身也容易水

6、解，所以它主要是通過旁分泌、自分泌的方式來發(fā)揮作用[12-13]，有些研究發(fā)現它還可以進入細胞核或核仁以內在分泌的方式影響細胞功能。在大鼠的胃粘膜肌層的平滑肌層細胞中已有學者通過免疫組化和分子雜交的方法證明了PTHrP的存在，是一種潛在的胃平滑肌弛緩劑，同時在成鼠的粘膜中亦有較微弱的表達，在受膽堿能刺激和胃膨脹等外界因素刺激下通過自分泌或旁分泌的方式作用于平滑肌細胞，調節(jié)胃的收縮，但在正常生理狀況下的作用尚不明確[14-16]。目前，尚

7、未有相關的入胃粘膜中是否有PTHrP的表達的及其功能研究的報道。 PTHrP與PTH（1-34）有相似的氨基末端（N端）序列，兩者能與共同的受體PTH/PTHrP受體-1（PTHR-1）結合，通過激活細胞內腺苷酸環(huán)化酶-環(huán)磷酸腺苷-蛋白激酶A（PKA）和磷脂酶C-胞漿鈣離子-蛋白激酶C（PKC）兩條信號傳導途徑發(fā)揮作用[11]，多年的實驗和臨床研究證實PTHrP不僅與PTH有相似的結構，還與PTH一樣有促進骨形成的作用，與PT

8、H相比，它只選擇性刺激骨形成、促進骨骼合成，具有起效快、副作用少等優(yōu)點，是一種優(yōu)于PTH的純粹的骨形成促進劑，大劑量（超過PTH10-20倍）用藥對內環(huán)境礦物質的穩(wěn)定沒有不良影響[13，17-18]。給小鼠注入PTHrP后可以刺激十二指腸鈣吸收的增加，而胃泌素對十二指腸鈣的吸收并沒有作用[19-20]。 因此，基于目前對PTHrP和胃鈣素的相關研究，有學者們提出在ECL細胞中分泌的PTHrP可能就是曾經假想的激素胃鈣素，其在調節(jié)

9、鈣吸收入骨及維持正常骨量方面發(fā)揮了重要的作用。本試驗擬對正常人胃粘膜中PTHrP的表達、定位及可能的影響因素做一初步研究。 目的: 檢測人胃泌酸粘膜ECL細胞中是否有PTHrP的表達，及其對胃泌素和PTHrP可能的關系進行一初步了解。 方法: 收集28例正常胃底、胃體上部粘膜，及診治前的空腹血清，其中包括7例行內鏡檢查和21例手術切除的標本，所有受檢者營養(yǎng)狀況良好或僅有輕度低蛋白血癥。應用RT-PCR和熒

10、光定量PCR方法從基因水平檢測胃泌酸粘膜中是否有PTHrP的表達及其相對表達量，通過免疫組織化學方法檢測胃粘膜ECL細胞中有無PTHrP的表達。應用ELISA方法檢測受檢者血清中PTHrP的表達水平，放射免疫法檢測其血清中的胃泌素表達量，并對血PTHrP、胃泌素及胃粘膜的PTHrP相對mRNA表達水平進行相關關系分析。 結果: 通過RT-PCR和qPCR方法檢測到正常人胃泌酸粘膜中有PTHrP的mRNA較微弱的表達；免疫

11、組化證明了PTHrP在人胃ECL細胞中有弱陽性表達；血清中PTHrP表達量較低，與胃泌素無顯著相關關系；而胃泌素與胃粘膜中PTHrP的mRNA表達水平之間有一顯著正相關關系，相關系數r=0.569，P=0.002。 結論: PTHrP在正常人胃泌酸粘膜ECL細胞中有較微弱的表達，檢測血清PTHrP值可能并不是一條反應胃粘膜分泌PTHrP多少的有效指標。胃泌素和胃粘膜中PTHrP的mRNA水平之間存在一正相關關系，胃泌素