Th細(xì)胞在IBS和IBD中的表型改變.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分：潰瘍性結(jié)腸炎患者腸粘膜和外周血中Th細(xì)胞表型的改變
　　 目的：探討Th細(xì)胞各亞群比例在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病中的變化及意義。
　　 方法：按照2007年濟(jì)南標(biāo)準(zhǔn)收集UC 患者20例，對(duì)照組16例。利用細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色和四色熒光抗體流式細(xì)胞術(shù)對(duì)UC組患者及對(duì)照組中腸粘膜和外周血淋巴細(xì)胞作表型分析，比較各組腸粘膜和外周血中Th1、Th2、Th17 比例改變，Western blot檢

2、測(cè)各組腸粘膜IL-4、IL-12、IL-17表達(dá)，ELISA檢測(cè)各組外周血IL-4、IL-12、IL-17水平。
　　 結(jié)果：(1)UC組患者腸粘膜中Th17 比例和IL-17表達(dá)較對(duì)照組明顯增加：Th17 比例在UC組和對(duì)照組分別為3.75（6.93)vs.1.25（3.70），P<0.05；IL-17表達(dá)在UC組和對(duì)照組分別為0.20（0.15）vs.0.10（0.03），P<0.05。UC組患者腸粘膜中IL-17表達(dá)與疾病

3、評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.503，P=0.024)。UC中、重度患者外周血中Th17 比例和IL-17表達(dá)增加：外周血中Th17 比例在UC中、重度患者和對(duì)照組中分別為1.40（2.15）vs.0.70（0.33），P<0.05；外周血中IL-17含量在UC中、重度患者和對(duì)照組中分別為1.58（3.37）pg·mL-1 vs.0.19（0.64）pg·mL-1，P<0.05。(2)腸粘膜中Th1的比例在UC和對(duì)照組中分別為13.6（16.8

4、8）vs.9.10（17.53）；外周血中Th1的比例在UC和對(duì)照組中分別為12.85（9.28）vs.10.15（7.48），UC組與對(duì)照組相比腸粘膜和外周血中Th1 比例差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且不同活動(dòng)度患者間無(wú)明顯差異。腸粘膜中IL-12的表達(dá)在UC組和對(duì)照組中分別是0.22（0.16）vs.0.16（0.13），表達(dá)無(wú)明顯改變。外周血中IL-12 水平在UC組與對(duì)照組中分別是1.59（2.26）pg·mL-1 vs.1.66（5.

5、79）pg·mL-1，兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)腸粘膜中Th2的比例在UC和對(duì)照組中分別為1.10（1.53）vs.1.15（1.50）；外周血中Th2的比例在UC和對(duì)照組中分別為1.20（0.55）vs.1.10（0.45），腸粘膜和外周血中差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不同活動(dòng)度患者間差異無(wú)顯著性。腸粘膜IL-4 在UC組和對(duì)照組中分別是0.29（0.14）vs.0.23（0.11），表達(dá)無(wú)明顯改變。外周血IL-4 水平在UC組與對(duì)照組

6、分別是1.27（2.48）pg·mL-1 vs.0（2.5）pg·mL-1，兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：在Th細(xì)胞各亞群中Th17細(xì)胞是介導(dǎo)UC 腸道局部和外周免疫應(yīng)答的優(yōu)勢(shì)細(xì)胞，它可能成為UC 治療的有效靶點(diǎn)。
　　 第二部分：腹瀉型IBS 患者腸粘膜和外周血中Th細(xì)胞表型的改變
　　 目的：探討Th細(xì)胞各亞群在腹瀉型IBS 患者中的變化，揭示IBS 粘膜免疫激活具體免疫學(xué)機(jī)制。
　　 方法

7、：按照羅馬Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)收集腹瀉型IBS 患者27例，另設(shè)對(duì)照組16例。采用細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色和四色熒光抗體流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組腸粘膜和外周血中Th1/Th2/Th17比例，Western blot檢測(cè)腸粘膜IL-4、IL-12、IL-17表達(dá)，ELISA檢測(cè)外周血IL-4、IL-12、IL-17 水平。
　　 結(jié)果：(1)腹瀉型IBS 患者部分腸粘膜病理學(xué)表現(xiàn)為非特異性炎癥，歸為IBS-A組，腸粘膜無(wú)非特異性炎癥者歸為IBS組。(2)I

8、BS-A組患者腸粘膜Th17 比例較對(duì)照組明顯增加，為3.60(4.05)vs.1.25（3.70），P=0.045，而Th1、Th2 比例無(wú)明顯改變；腸粘膜中相關(guān)細(xì)胞因子IL-4、IL-12、IL-17表達(dá)與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 IBS-A組外周血中Th1、Th2、Th17 比例和對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。外周血中相關(guān)細(xì)胞因子IL-4、IL-12、IL-17 水平與對(duì)照組比較也無(wú)明顯改變。(3)IBS組患者腸粘

9、膜及外周血Th細(xì)胞比例和相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)均無(wú)明顯改變。
　　 結(jié)論：腹瀉型IBS 患者部分存在腸粘膜非特性炎癥，提示腸粘膜存在免疫激活，該免疫狀態(tài)表現(xiàn)為T(mén)h細(xì)胞向Th17 偏移。 第三部分：Th17細(xì)胞在旋毛蟲(chóng)感染小鼠內(nèi)臟高敏感性中的作用
　　 目的：研究發(fā)現(xiàn)旋毛蟲(chóng)感染小鼠在急性感染期會(huì)出現(xiàn)腸道功能紊亂，在腸道炎癥消退后腸道功能紊亂癥狀仍可持續(xù)存在。本實(shí)驗(yàn)旨在闡明Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在旋毛蟲(chóng)感染小鼠急性和慢性感染期

10、期出現(xiàn)的內(nèi)臟高敏感性中的作用。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、感染后2 周組、8 周組和12 周組。用含有旋毛蟲(chóng)的混懸液灌胃方法感染NIH小鼠，劑量為300條/只；結(jié)直腸擴(kuò)張誘導(dǎo)的腹部回撤反射（AWR）評(píng)估內(nèi)臟敏感性；HE 染色觀(guān)察空腸和結(jié)腸粘膜炎癥狀態(tài)；細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色檢測(cè)空腸和結(jié)腸粘膜固有層Th17細(xì)胞比例；Wentern blot檢測(cè)空腸和結(jié)腸粘膜IL-17、IL-23和 TGF-β1 蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：旋毛

11、蟲(chóng)感染造成的空腸和結(jié)腸一過(guò)性炎癥在感染后2 周時(shí)最明顯，感染后8 周時(shí)腸粘膜破壞和炎癥反應(yīng)基本消失，感染后12w時(shí)空腸和結(jié)腸粘膜無(wú)明顯炎癥改變。AWR 評(píng)分在感染后2 周時(shí)最高，感染后8 周和12 周時(shí)仍高于對(duì)照組水平（P<0.05）。空腸和結(jié)腸粘膜固有層Th17細(xì)胞比例和IL-17表達(dá)在感染后2 周時(shí)增高（P<0.05），感染后8 周和12 周降至正常水平。感染后2 周，感染組和對(duì)照組小鼠空腸粘膜Th17細(xì)胞比例分別是9.13±2.7

12、3 vs. 3.78±1.97，P<0.01；結(jié)腸粘膜中Th17細(xì)胞比例分別是8.00±2.43 vs. 3.6±1.80，P<0.01。感染后2 周，感染組和對(duì)照組空腸中IL-17含量分別是1.70±0.47和0.68±0.26，P<0.01；結(jié)腸中IL-17含量分別是0.59±0.12和0.44±0.09，P=0.041。2 周時(shí)空腸和結(jié)腸粘膜IL-17表達(dá)與AWR 評(píng)分呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別是r=0.658，P=0.032和r=0

13、.532，P=0.04?？漳c和結(jié)腸粘膜TGF-β1表達(dá)在感染后2 周時(shí)增加，8 周和12 周降至正常水平。感染后2 周，空腸中TGF-β1含量在感染組和對(duì)照組分別是0.31±0.03和0.17±0.05，P<0.01；結(jié)腸中TGF-β1含量在感染組和對(duì)照組分別是0.11±0.03和0.08±0.02，P=0.035。急、慢性感染期間空腸和結(jié)腸粘膜IL-23表達(dá)無(wú)明顯改變。
　　 結(jié)論：旋毛蟲(chóng)感染NIH小鼠造成腸道一過(guò)性炎癥，炎癥