男（雄）性生殖系統(tǒng)與加德納氏菌感染的研究.pdf

1、本文論述了男（雄）性生殖系統(tǒng)與加德納氏菌感染的研究。 加德納菌（Gardnerella vaginalis,Gv）是一類革蘭染色陰性小桿菌或變異的球菌樣小桿菌，厭氧，嗜血,培養(yǎng)困難?？杉纳谌祟惖拿谀蛳到y(tǒng)，Gv是女性細菌性陰道病（Bacterial vaginosis,BV）的主要病原菌之一，女性Gv感染不僅可以致BV，并可引起輸卵管妊娠、胎膜早破和新生兒早產(chǎn)等不良妊娠結局。近年來研究表明，Gv可以經(jīng)過性接觸傳播，與男性尿道感染

2、和不育有關，并可引起腦炎、腎盂腎炎、肝膿瘍、肺膿腫等。目前，對于Gv的致病機制及其導致不育的機理尚未闡明。臨床上見到Gv的感染常伴隨溶脲脲原體（Ureaplasma urealyticum,UU）的感染，據(jù)研究表明UU可以影響精子的發(fā)生并導致不育，有關Gv感染與不育及精子發(fā)生的關系還有待進一步體內、體外實驗研究證實。 為此，本課題著重分兩部分研究：（1）建立Gv感染SD雄性大鼠生殖系統(tǒng)模型，檢測相關指標的改變；（2）研究Gv導致

3、精子發(fā)生障礙，少精癥的原理。 第一部分：Gv感染SD雄性大鼠生殖系統(tǒng)模型的建立。 從臨床標本中分離出Gv，進行培養(yǎng)、傳代，經(jīng)過革蘭染色、馬尿酸實驗、電鏡觀察等一系列方法進行鑒定。確定為Gv后，傳代，刮取細菌，用Gv培養(yǎng)液稀釋成濃度為108/ml的Gv菌液待用。取臨床不育患者精液標本進行革蘭染色，檢測Gv。取性成熟的SD雄性大鼠18只，隨機分成對照組和實驗組兩組，在無菌環(huán)境下，戊巴比妥腹腔注射麻醉后，打開腹腔，暴露膀胱，抽

4、取尿液，實驗組和對照組分別注射等量的Gv菌液和無菌培養(yǎng)基，關閉腹腔。大鼠取仰臥位，待其清醒后于無菌環(huán)境中養(yǎng)殖觀察。在21d處死大鼠，稱重，打開腹腔，觀察內臟器官的形態(tài)改變情況，取出睪丸稱重，部分睪丸組織立即放入Boiun’s液中固定，用于HE染色，光鏡觀察；部分睪丸組織置2％戊二醛中固定，常規(guī)電鏡標本制備，半薄切片甲苯胺藍染色，半定位，超薄切片電鏡觀察拍照，觀察發(fā)現(xiàn)實驗組大鼠睪丸支持細胞形態(tài)改變：細胞收縮，細胞間出現(xiàn)大的間隙，細胞膜不規(guī)

5、則，細胞質內出現(xiàn)大量的空泡和髓樣結構，脂滴明顯增大，核收縮，核膜不規(guī)則。生精小管內生精細胞排列紊亂。另取部分組織劃板培養(yǎng)。實驗證實感染Gv的實驗組大鼠睪丸相對重量較對照組減輕，HE染色光鏡觀察發(fā)現(xiàn)生精小管出現(xiàn)病理變化；取同側附睪尾部組織放入PBS中進行精子上游試驗，檢測精子動力，發(fā)現(xiàn)實驗組感染Gv的大鼠精子活動率明顯降低。這組實驗的意義在于: 有助于直接觀察Gv對精子發(fā)生的影響；有利于觀察Gv對生育能力的影響?？傊?，對于闡明Gv導致男性

6、不育的機制及其泌尿生殖系統(tǒng)感染的關系具有重要的理論意義和臨床意義。 第二部分：Gv感染誘導生殖細胞凋亡。 在建立Gv感染雄性大鼠模型的基礎上，進行生殖細胞凋亡檢測，分別取對照組動物睪丸組織及感染21d后的部分睪丸組織常規(guī)固定、包埋、切片后HE染色，光鏡下觀察凋亡細胞；部分睪丸組織做成勻漿用流式細胞儀做凋亡細胞的檢測。結果顯示：對照組動物睪丸的生精細胞凋亡發(fā)生率很低，21d的大鼠，光鏡下典型凋亡的睪丸生精細胞明顯多于對照組

7、，可見生精上皮內許多生精細胞出現(xiàn)細胞核邊聚或濃集，呈新月狀或花瓣狀，部分生精細胞凋亡嚴重，可見有大量的多核巨細胞，成群的生精細胞脫落進入生精小管管腔和附睪管管腔；電鏡下：實驗組大鼠睪丸生精細胞出現(xiàn)大量不同時期凋亡現(xiàn)象，染色質濃縮，多數(shù)附于核膜，附著區(qū)核孔消失，部分核發(fā)生碎裂，有的形成大囊泡，出現(xiàn)明顯的發(fā)泡現(xiàn)象，有些細胞崩解成一系列大小不等的有質膜圍繞的致密凋亡小體；支持細胞的形態(tài)學改變：細胞收縮、細胞間出現(xiàn)大的間隙，細胞膜不規(guī)則，細胞質