眼針對(duì)腹瀉型腸易激綜合征模型大鼠結(jié)腸VIP及其受體1表達(dá)影響.pdf

1、目的：
　　 應(yīng)用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，觀測(cè)眼針對(duì)腹瀉型腸易激綜合征（Diarrhea-predominant-irritable bowel syndrome，D-IBS）模型大鼠結(jié)腸血管活性腸肽（vasoactive intestinal peptide，VIP）及其受體1（VIP1-R）表達(dá)影響，探討眼針治療D-IBS的作用機(jī)制，為眼針治療D-IBS的科學(xué)內(nèi)涵提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 健康SPF級(jí)雄

2、性Wistar大鼠，體重200±20g，共40只。按體重分成4組，即對(duì)照組、模型組、眼針組、匹維溴胺組（下簡(jiǎn)稱西藥組），分籠飼養(yǎng)，每籠5只，共計(jì)8籠。采用應(yīng)激結(jié)合束縛的方法復(fù)制D-IBS動(dòng)物模型，經(jīng)過(guò)18d造模，按照模型評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)鑒定模型，模型復(fù)制成功。對(duì)照組予以等容量的生理鹽水灌胃18d，自由攝取標(biāo)準(zhǔn)飲食和水，無(wú)刺激飼養(yǎng)7d；模型組造模結(jié)束后，自由攝取標(biāo)準(zhǔn)飲食和水，無(wú)刺激飼養(yǎng)7d；予針灸組7d的眼針治療；西藥組依據(jù)“等效劑量”原則，以1

3、5mg/kg千克的匹維溴胺灌胃給藥7d。標(biāo)本采集：治療結(jié)束后將大鼠處死，取距肛門(mén)10cm處結(jié)腸1-2cm，用眼科剪刀延結(jié)腸長(zhǎng)軸將結(jié)腸展開(kāi)，用生理鹽水沖洗干凈，用滅菌錫紙包好結(jié)腸組織并且明確標(biāo)號(hào)后，放在-70℃保存，備用。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法檢測(cè)各組大鼠結(jié)腸組織VIP及VIP1-R mRNA的表達(dá)，用ELISA方法檢測(cè)各組大鼠結(jié)腸組織中VIP相對(duì)含量，用免疫組化方法檢測(cè)各組大鼠結(jié)腸組織VIP及VIP1-R蛋白的表達(dá)并

4、進(jìn)行分析。應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件。
　　 結(jié)果：
　　 1.排便粒數(shù)顯示：與對(duì)照組比較，模型組、眼針組、西藥組排出糞便顆粒明顯增加（P<0.01）。排出玻璃小球時(shí)間顯示：與對(duì)照組比較，模型組、眼針組、西藥組排出玻璃小球時(shí)間顯著縮短（P<0.01）。大鼠的腹部回縮反射半定量評(píng)分顯示：與對(duì)照組比較，模型組、眼針組、西藥組大鼠結(jié)腸擴(kuò)張時(shí)大鼠腹肌收縮反應(yīng)進(jìn)行半定量評(píng)分明顯升高且差異性顯著（P<0.01）。大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)

5、顯示：各組大鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)正常，結(jié)腸粘膜上皮呈單層柱狀，固有層可見(jiàn)粘膜肌層，疏松的粘膜下層外可見(jiàn)肌層。粘膜上皮完整，均無(wú)充血、水腫、潰瘍，無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)間質(zhì)無(wú)水腫等病理組織學(xué)改變，表明D-IBS模型復(fù)制成功。
　　 2.以β-actin作為內(nèi)參，與對(duì)照組比較，模型組結(jié)腸組織中VIP及VIP1-R mRNA表達(dá)上調(diào)（P<0.01）；與模型組比較，眼針組與西藥組結(jié)腸組織中VIP及VIP1-R mRNA表達(dá)下調(diào)（P<0.01）；眼針組

6、與西藥組兩組間結(jié)腸組織中VIP及VIP1-R mRNA表達(dá)比較均無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 3.ELISA方法檢測(cè)所示：與對(duì)照組比較，模型組結(jié)腸組織中VIP相對(duì)含量顯著上升（P<0.01）；與模型組比較，眼針組與西藥組結(jié)腸組織中VIP相對(duì)含量明顯降低（P<0.01）；后兩者組間比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 4.免疫組化法檢測(cè)顯示：與對(duì)照組比較，模型組結(jié)腸組織中VIP及VIP1-R蛋白表達(dá)明顯上調(diào)（P

7、<0.01）；與模型組比較，眼針組與西藥組結(jié)腸組織中VIP及VIP1-R蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.01）；后兩者組間比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1 D-IBS模型大鼠排便粒數(shù)增多、排出玻璃小球時(shí)間縮短、大鼠的腹部回縮反射半定量評(píng)分達(dá)到2分以上、大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)無(wú)改變。
　　 2 D-IBS模型大鼠結(jié)腸組織中VIP相對(duì)含量上升、VIP mRNA及蛋白表達(dá)上調(diào)；眼針能使結(jié)腸組織中VIP相