桃仁的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、桃仁為薔薇科植物桃Prunus persica(L.)Batsch或山桃Prunusdavidiana(Carr.)Franch.的干燥成熟種子,果實(shí)成熟后采收,除去果肉和核殼,取出種子,曬干。性平味苦甘,歸心、肝、大腸經(jīng)。功能為活血祛瘀,潤(rùn)腸通便,止咳平喘,孕婦慎用。本品始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,現(xiàn)代研究表明桃仁對(duì)心腦血管疾病療效顯著,近年來(lái)受到廣泛關(guān)注,但一直以來(lái)對(duì)桃仁的有效成分缺乏系統(tǒng)的研究,也沒(méi)有具體的質(zhì)量評(píng)價(jià)系統(tǒng),致使桃仁藥材市場(chǎng)

2、流通處于混亂。故本試驗(yàn)采用TLC、HPLC以及指紋圖譜法對(duì)采自山東、山西以及河北承德、安國(guó)等不同產(chǎn)地和不同品種的15份桃仁進(jìn)行質(zhì)量研究,為評(píng)價(jià)桃仁質(zhì)量及臨床合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。
　　 目的:通過(guò)試驗(yàn)對(duì)不同產(chǎn)地和品種桃仁的研究,建立桃仁藥材的薄層色譜、含量測(cè)定及指紋圖譜的方法,為科學(xué)評(píng)價(jià)與有效控制桃仁的質(zhì)量提供依據(jù)。
　　 方法:1薄層色譜方法的建立(1)提取條件:考察不同的提取方法和提取溶劑對(duì)結(jié)果的影響,選用適宜的提取

3、方法和提取溶劑。(2)展開條件:根據(jù)桃仁藥材中主要指標(biāo)成分化學(xué)性質(zhì)的特點(diǎn),確定適宜的固定相、展開系統(tǒng)、顯色系統(tǒng)等。
　　 2含量測(cè)定方法的建立(1)提取條件:考察不同提取方法、不同提取溶劑對(duì)提取桃仁藥材中主要指標(biāo)成分的影響,繼而選取影響提取效率的三個(gè)主要因素:溶劑用量、提取時(shí)間、提取次數(shù),采用正交設(shè)計(jì)對(duì)含量測(cè)定的前處理工藝進(jìn)行優(yōu)化,以選擇提取效率較高的提取條件。(2)色譜條件:選擇適宜的固定相,調(diào)整流動(dòng)相的組成、配比、流速、進(jìn)樣

4、量,調(diào)節(jié)柱溫以使苦杏仁苷色譜峰與其它雜質(zhì)峰完全分離。(3)系統(tǒng)適用性試驗(yàn):在已確定的色譜條件下,考察苦杏仁苷色譜峰的理論板數(shù)、分離度。(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:配制系列濃度的苦杏仁苷對(duì)照品溶液,分別進(jìn)樣,測(cè)定峰面積,以苦杏仁苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(5)精密度試驗(yàn):取同一份對(duì)照品溶液和供試品溶液,分別重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定峰面積。(6)重復(fù)性試驗(yàn):取同一批桃仁藥材6份,制備供試品溶液,分別進(jìn)樣,測(cè)定峰面積。(7)穩(wěn)定

5、性試驗(yàn):分別取同一份對(duì)照品溶液和供試品溶液,分別于放置0,4,8,12,24,48 h后進(jìn)樣,測(cè)定峰面積。(8)回收率試驗(yàn):取已知苦杏仁苷含量的桃仁藥材適量,分別加入等量的苦杏仁苷對(duì)照品,測(cè)定苦杏仁苷的含量,計(jì)算平均回收率和RSD值。(9)最低限檢測(cè)的測(cè)定:將苦杏仁苷對(duì)照品溶液逐步稀釋,當(dāng)信噪比S/N≥3時(shí)確定為最低檢測(cè)限。(10)樣品測(cè)定:在上述色譜條件下,測(cè)定15批桃仁藥材中苦杏仁苷的含量。
　　 3指紋圖譜方法的建立(1)

6、提取條件:比較不同提取溶劑、不同提取方法及不同提取時(shí)間的提取效果,選擇提取成分較多,提取率較高的提取條件。(2)色譜條件:選用合適的色譜柱、檢測(cè)器及檢測(cè)波長(zhǎng),調(diào)整流動(dòng)相的組成、配比、流速,調(diào)節(jié)柱溫,使色譜圖符合指紋圖譜研究的要求。(3)系統(tǒng)適用性試驗(yàn):在已確定的色譜條件下,考察苦杏仁苷色譜峰的理論板數(shù)、分離度。(4)精密度試驗(yàn):制備樣品溶液1份,重復(fù)進(jìn)樣6次,記錄保留時(shí)間和峰面積,考察試驗(yàn)方法的精密度。(5)重復(fù)性試驗(yàn):平行制備樣品溶液

7、6份,分別進(jìn)樣,記錄保留時(shí)間和峰面積,考察試驗(yàn)方法的重復(fù)性。(6)穩(wěn)定性試驗(yàn):制備樣品溶液1份,分別放置0,4,8,12,24,48 h后進(jìn)樣,記錄保留時(shí)間和峰面積,考察試驗(yàn)方法的穩(wěn)定性。(7)指紋圖譜的建立:分別取同一品種不同產(chǎn)地桃仁藥材10批,其他不同品種的桃仁藥材5批,制備供試品溶液,進(jìn)行指紋圖譜分析,相似度評(píng)價(jià)。
　　 結(jié)果:1薄層色譜方法:(1)提取方法:樣品加甲醇10ml,超聲處理30min,離心,取上清液作為供試品

8、溶液。(2)展開條件:以三氯甲烷——乙酸乙酯.甲醇.水(15:40:22:10)5-10℃放置12h的下層溶液為展開劑,展開,取出,揮干溶劑后以0.8％磷鉬酸的15％硫酸乙醇溶液(現(xiàn)用現(xiàn)配)浸板,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
　　 2含量測(cè)定方法:(1)提取條件:確定了對(duì)桃仁進(jìn)行含量測(cè)定的前處理工藝:50倍甲醇超聲提取一次,提取時(shí)間為30min。(2)色譜條件:采用安

9、捷倫C18色譜柱(4.6mmx250mm,5μm);以甲醇——水(15:85)為流動(dòng)相;流速1.0ml/min;柱溫30℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm;進(jìn)樣量10μl。在此色譜條件下,苦杏仁苷峰保留時(shí)間約為12min,分離度大于1.5,理論塔板數(shù)不低于4000。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:苦杏仁苷在0.138-13.8μg范圍內(nèi),線性關(guān)系良好?；貧w方程為Y=513.57X+20.704,r=0.9999(n=6)
　　 (4)精密度試驗(yàn):儀

10、器和方法的精密度良好,RSD分別為0.71％、1.22％。
　　 (5)重復(fù)性試驗(yàn):樣品的重復(fù)性良好,RSD為0.53％。(6)。穩(wěn)定性試驗(yàn):對(duì)照品和樣品在48h內(nèi)均穩(wěn)定,RSD分別為1.44％、0.96％。(7)回收率試驗(yàn):樣品平均回收率為99.57％,RSD為2.50％。(8)苦杏仁苷的最低檢測(cè)限為40.1032ng。(9)桃仁藥材中苦杏仁苷的含量為2.332％-3.532％。
　　 3指紋圖譜方法:(1)提取:以7

11、0％甲醇超聲60min為佳,具有穩(wěn)定和效率高等優(yōu)點(diǎn)。(2)色譜條件:色譜柱為Waters Symmetry C18柱(4.6mm×250mm,5μm);乙腈——水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,流速為1.0ml/min,柱溫為30℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm,進(jìn)樣量10μl。(3)系統(tǒng)適用性試驗(yàn):在此色譜條件下,苦杏仁苷的保留時(shí)間約為20min,理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算約為50000,與其它色譜峰的分離度大于1.0。(4)精密度試驗(yàn):以苦杏仁苷峰為內(nèi)

12、參比峰,計(jì)算各主要色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和峰面積占總峰面積5％以上峰的峰面積值,其RSD值分別為0.024％-0.137％和0.278％-1.621％,精密度良好。(5)重復(fù)性試驗(yàn):各主要色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和占總峰面積5％以上色譜峰的相對(duì)峰面積均無(wú)明顯變化,其RSD分別為0.069％-0.573％和1.075％-2.269％,重復(fù)性良好。(6)穩(wěn)定性試驗(yàn):各主要色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和峰面積占總峰面積5％以上峰的峰面積比值均無(wú)明顯變化,其RSD

13、分別為0.004％-0.245％和1.075％-1.951％,穩(wěn)定性良好。(7)指紋圖譜的建立:得到桃仁藥材的指紋圖譜及15個(gè)共有峰,同時(shí)得到不同品種來(lái)源桃仁藥材的指紋圖譜。(8)數(shù)據(jù)分析:運(yùn)用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”2004年A版(國(guó)家藥典委員會(huì)開發(fā))對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,所得結(jié)果能反映桃仁藥材的質(zhì)量。
　　 結(jié)論:1薄層色譜:該方法顯現(xiàn)斑點(diǎn)清晰,重復(fù)性和穩(wěn)定性良好,能夠更好的作為桃仁的定性鑒別方法。
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