2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本研究通過建立神經(jīng)母細胞瘤細胞(SHSY5Y)體外模擬缺血再灌(imitativeischemia-reperfusion)模型,探討神經(jīng)細胞凋亡的途徑及褪黑素(melatonin,MT)和N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)抗氧化、抗凋亡的作用機制,為缺血再灌注誘導(dǎo)腦神經(jīng)元凋亡的基礎(chǔ)性研究和臨床有效防治老年(血管)性癡呆(Vasculardementia,VD)提供新的理論依據(jù)。 體外常規(guī)培養(yǎng)人神經(jīng)母細

2、胞瘤細胞株SHSY5Y,然后模擬缺血再灌注培養(yǎng)(先缺糖缺氧,后正常培養(yǎng))建立細胞模型;實驗分正常對照組、缺氧再灌組及M/NAC藥物組;瓊脂糖凝膠電泳、流式細胞儀和透射電鏡檢測細胞凋亡情況;MTT法檢測細胞生存活力;熒光比色法檢測細胞內(nèi)活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)產(chǎn)生;HLPC檢測興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸(Glutamate,Glu)的釋放;分光光度法檢測Caspase-3活性和乳酸脫氫酶(lactatedeh

3、ydrogenase,LDH)活性;Westernblotting及ELISA法檢測細胞色素C(cytochromeC,Cyt.C)釋放;激光共聚焦顯微鏡及熒光比色法觀察線粒體跨膜壓(⊿ψm)改變。實驗觀察模擬缺血再灌注誘導(dǎo)的神經(jīng)細胞凋亡過程是否主要通過線粒體凋亡途徑,褪黑素和N-乙酰半胱氨酸是否通過抗氧化、抗線粒體凋亡而具有神經(jīng)元保護作用。 SHSY5Y細胞在模擬缺血90min再灌24h后,瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)典型凋亡特征的DN

4、A片段化,流式細胞儀檢測也證實有大量凋亡細胞存在,透射電鏡獲得清晰可見的凋亡細胞亞微結(jié)構(gòu)圖像;模擬缺血再灌注處理后細胞內(nèi)興奮性神經(jīng)遞質(zhì)Glu大量釋放,比正常對照組高出70.2%(P<0.01);細胞內(nèi)LDH大量釋放,培養(yǎng)液中LDH活性與對照組相比增加41.7%(P<0.01);細胞內(nèi)活性氧(ROS)在模擬缺血90min再灌注Omin時即明顯升高,30min時達到最高點,與對照組相比,P<0.01;模擬缺血90min再灌1h后線粒體跨膜電

5、位明顯下降(與對照組相比,P<0.01),3h后迅速升高,6h后又下降,直到24h也沒有恢復(fù);細胞色素C在模擬缺血90min再灌3h后開始釋放,6h達到最高峰(與對照組相比,P<0.01),直到24h后依然維持較高水平;Caspase-3活性在缺血90min再灌0-24h內(nèi),隨著再灌注時間延長逐漸增加,再灌12h后顯著增加,與對照組相比,P<0.01。褪黑素和N-乙酰半胱氨酸均能顯著降低再灌組細胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生,降低再灌組細胞內(nèi)興奮性神

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