CpG-ODN對(duì)Hela細(xì)胞FasL-Fas凋亡途徑影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 觀察CpG-ODN對(duì)HeLa細(xì)胞和Jurkat細(xì)胞FasL、Fas mRNA表達(dá)水平的影響，篩選CpG-ODN與HeLa和Jurkat細(xì)胞的最適工作濃度和最適作用時(shí)間，在最適工作濃度和最適作用時(shí)間條件下觀察CpG-ODN對(duì)HeLa和Jurkat細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法: 不同濃度的CpG-ODN(M362)體外孵育HeLa和Jurkat細(xì)胞12小時(shí)后實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)FasL、Fas mRNA的表達(dá)水平，由此決

2、定CpG-ODN的最適工作濃度；在最適工作濃度時(shí)，M362體外孵育HeLa和Jurkat細(xì)胞4、12、24、36、48小時(shí)后實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)FasL、Fas mRNA的水平，由此決定CpG-ODN的最適作用時(shí)間；應(yīng)用HeLa細(xì)胞與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)的方法體外研究CpG-ODN對(duì)HeLa細(xì)胞和Jurkat細(xì)胞相互作用中FasL-Fas途徑所致細(xì)胞凋亡的作用。
　　 結(jié)果:
　　 ① CpG-ODN的作用呈濃度依

3、賴性。與對(duì)照組相比，CpG-ODN的濃度為0.001μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L時(shí)，HeLa和Jurkat細(xì)胞與M362作用12h后處理組FasL mRNA的rER值的差異在CpG-ODN的濃度為0.001μmol/L、0.01μmol/L不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，在CpG-ODN的濃度為0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.

4、05)，在處理組1μmol/L和10μmol/L之間的差別不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 ② CpG-ODN的作用呈時(shí)間依賴性。與時(shí)間點(diǎn)0小時(shí)相比，CpG-ODN的濃度為最適濃度1μmol/L時(shí)，HeLa和Jurkat細(xì)胞與M362作用4、12、24、36、48小時(shí)后FasL mRNA的rER值在12、24、36、48小時(shí)處均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)，在4小時(shí)處沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與時(shí)間點(diǎn)24小時(shí)相比，36、48小時(shí)處均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

5、
　　 ③ CpG-ODN能不同程度的下調(diào)HeLa和Jurkat細(xì)胞FasLmRNA的表達(dá)。1μmol/L的M362與HeLa和Jurkat細(xì)胞作用24小時(shí)后FasL mRNA的rER值均有所下降，且HeLa細(xì)胞的下降幅度比Jurkat細(xì)胞大，與作用前相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　 ④ CpG-ODN對(duì)HeLa和Jurkat細(xì)胞Fas mRNA的表達(dá)水平?jīng)]有影響。1μmol/L的M362與HeLa和Jur

6、kat細(xì)胞作用24小時(shí)后Fas mRNA的rER值變化不一，與作用前相比差別均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　 ⑤ CpG-ODN能減少HeLa誘導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞凋亡。CpG-ODN預(yù)處理的HeLa細(xì)胞與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)后Jurkat細(xì)胞凋亡率為(6.41 2.81)%，而沒(méi)有用CpG-ODN預(yù)處理的HeLa細(xì)胞與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)Jurkat細(xì)胞凋亡率為(29.23 6.85)%，二者的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(