CpG-ODN對人膀胱癌細胞T24的作用以及與化療藥聯(lián)用的藥效研究.pdf

1、目的：
　　作為泌尿系統(tǒng)中常見的腫瘤疾病之一，膀胱癌的發(fā)病率近年來呈現(xiàn)逐漸增長的趨勢。先前的有關數(shù)據表明，一種具有特定結構的寡聚脫氧核苷酸（CpG-ODN）對某些腫瘤疾病具有潛在的治療效果。本實驗中，我們主要研究這種特定結構的CpG-ODN對人膀胱癌細胞T24的影響及相關作用機制；同時，評價CpG-ODN與化療藥聯(lián)用對藥效的影響，為臨床治療提供實驗基礎。
　　方法：
　　常規(guī)培養(yǎng)T24細胞，采用MTS法檢測CpG-OD

2、N及其脂質體對T24細胞的體外抑制作用，并探討劑量-時間-效應關系，同時對比CpG-ODN與卡介苗單獨作用的效果以及脂質體包裹與否對抑制作用的影響；此外可以通過Real-time PCR法檢測T24細胞內抗凋亡因子Bcl-2在CpG-ODN及其脂質體作用后的表達變化。
　　CpG-ODN與阿霉素（DOX）或五氟尿嘧啶（5-FU）單獨或聯(lián)合體外作用于T24細胞，采用MTS、Hoechst33258、以及流式細胞儀等方法分別檢測細胞活

3、性，觀察細胞核的形態(tài)變化，分析T24細胞的凋亡和周期分布情況，再通過Real-time PCR法分析細胞內抗凋亡因子Bcl-2的表達變化。
　　結果：
　　CpG-ODN能夠有效遏制T24細胞的體外活性，并且呈濃度和時間依賴性，其單獨作用的效果也強于卡介苗，而脂質體包裹的CpG-ODN能夠更加顯著的抑制T24細胞的體外活性。Real-time PCR則檢測到在CpG-ODN及其脂質體的作用下，T24細胞內抗凋亡因子Bcl-2

4、 mRNA的表達都有所下調，并且脂質體組下調效果更顯著。Bcl-2家族抗凋亡因子與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關，Bcl-2的表達下調也可以刺激相關藥物作用于腫瘤細胞，引起凋亡的發(fā)生。
　　CpG-ODN和DOX單獨作用都可以降低T24細胞的活性，聯(lián)用后對T24的活性抑制作用減弱。而CpG-ODN與5-FU聯(lián)用后，對T24細胞的體外活性抑制效果強于二者單獨作用，并可以進一步促進細胞凋亡，誘導細胞周期阻滯于S期，同時抗凋亡因子Bcl-2 m

5、RNA的表達量更少。
　　結論：
　　CpG-ODN能夠有效降低T24細胞的體外活性，原因之一是下調抗凋亡因子Bcl-2的表達從而減少細胞增殖。脂質體包裹的CpG-ODN抑制作用更強。CpG-ODN并非是所有化療藥的增敏劑，與DOX聯(lián)用后效果低于DOX單獨使用，而與5-FU聯(lián)用則產生促進作用，能夠進一步誘導T24細胞凋亡，影響細胞周期，并顯著下調Bcl-2的表達。綜合看來，CpG-ODN有望成為治療膀胱癌的新型小分子核酸藥物