重組復(fù)制缺陷型腺病毒載體介導(dǎo)的VEGFcDNA和bFGFcDNA聯(lián)合應(yīng)用基因治療缺血皮瓣的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文重組復(fù)制缺陷型腺病毒載體介導(dǎo)的VEGFcDNA和bFGFcDNA聯(lián)合應(yīng)用基因治療缺血皮瓣的實(shí)驗(yàn)研究姓名：王偉申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（整形外科）指導(dǎo)教師：汪春蘭20050501安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文重組復(fù)制缺陷型腺病毒載體介導(dǎo)的VEGFcDNA和bFGFcDNA聯(lián)合應(yīng)用基因治療缺血皮瓣的實(shí)驗(yàn)研究摘要目的探討局部應(yīng)用以復(fù)制缺陷型腺病毒為載體的血管內(nèi)皮生長因子(Ad—VEGF)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(Ad—

2、bFGF)聯(lián)合應(yīng)用基因治療對大鼠隨意缺血皮瓣生存的影響，以觀察兩者是否有協(xié)同作用。方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用50只sD大鼠，體重350～400克，普通級(jí)，雌雄不論，以標(biāo)準(zhǔn)全價(jià)飼料在實(shí)驗(yàn)室分籠喂養(yǎng)，以使其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。將大鼠隨機(jī)分成五組，每組10只，25％戊巴眈妥鈉腹腔注射麻醉(40mg／kg)。四肢固定后，背部8％硫化鈉脫毛、消毒。于大鼠背部正中設(shè)計(jì)蒂在尾側(cè)的隨意皮瓣，皮瓣的長寬為8cmX2cm，蒂部位于髂嵴水平。于皮瓣遠(yuǎn)端真皮下分別注射Ad—

3、VEGF&Ad—bFGF(10只目的基因組)，Ad—VEGF(10只基因?qū)φ战M)，Ad—bFGF(10只基因?qū)φ战M)Ad—GFP(10只綠色熒光蛋白基因?qū)φ战M)，PBS(10只磷酸鹽緩沖液空白對照組)。484時(shí)后重新麻醉大鼠，按原設(shè)計(jì)掀起皮瓣，于深筋膜下鈍性分離至皮瓣蒂部，活動(dòng)性出血予以嚴(yán)格止血，原位用50’絲線間斷縫合，保證皮膚對合良好，術(shù)后單籠飼養(yǎng)7天，觀察皮瓣的成活情況，測量皮瓣的成活面積、計(jì)算成活率，并采集組織行免疫組化，組織學(xué)

4、檢查等。觀察單位面積的微血管計(jì)數(shù)、光鏡觀察組織愈合情況。結(jié)果5組中Ad—VEGF＆Ad_bFGF組皮瓣成活率最高為(7818181％)，與Ad—VEGF對照組(6467308％)、Ad—bFOF對照組(6557313％)有顯著性差異(尸O01)。Ad—VEGF組與Ad—bFGF組問無顯著差異性，但與AdGFP(5027175％)組及PBS(4962199％)組間有顯著性差異(P001)。免疫組化基因轉(zhuǎn)染組毛細(xì)血管周圍VEGF、bFGF沉