稻瘟菌cDNA文庫的構建及其激活蛋白編碼基因的克隆與表達研究.pdf

1、水稻稻瘟病是一種世界性的水稻病害。在有利于發(fā)病的條件下，嚴重發(fā)病的田塊，產量損失高達80％。傳統的防治病蟲害方法是以采用化學農藥為主要手段，雖有一定效果但易產生病蟲抗藥性，給環(huán)境帶來災難性的破壞。所以，開發(fā)和使用新型綠色生物農藥是科學家們面臨的緊迫而艱巨任務。 激活蛋白是一類從病原真菌中分離純化的一種新型耐熱蛋白，對煙草花葉病毒和黃瓜花葉病毒等植物病毒有顯著的誘抗活性，可望成為一類新型的生物農藥。為了進一步推動激活蛋白的研究與應

2、用，本論文采用固相構建法成功構建稻瘟菌cDNA文庫，該文庫的庫容量為5×107，文庫滴度為1×107，陽性克隆率為98％。以所建文庫的噬菌體DNA為模板，根據前人已獲得的激活蛋白的部分序列設計了兩個特異性引物，用PCR法從文庫中成功克隆獲得編碼激活蛋白的cDNA序列，該序列共有951個堿基，編碼316個氨基酸。 以克隆的激活蛋白基因為目的基因，構建了原核表達載體pGEX-XF-1，轉化到大腸桿菌BL21和ER2566中，通過IP