Legumain促進胃癌的生長和轉移及機制研究.pdf

1、[目的]
　　以往研究證實豆蛋白酶(Legumain)在很多實體瘤中高表達，比如乳腺癌、結腸癌等。本研究選取人胃腺癌標本（包括癌旁組織、腫瘤起源、腫瘤侵襲前緣和腫瘤轉移灶），檢測了Legumain的表達情況，探討Legumain在胃腺癌腫瘤組織標本中的表達是否與病人的預后相關，評估在胃腺癌組織中Legumain的表達是否與MMP-2的表達有相關性，同時探討Legumain促進胃癌生長和轉移的機制。
　　[方法]
　　1

2、.首先應用WesternBlot、Real-timePCR和免疫組織化學分析了Legumain在4例胃腺癌病人癌旁組織和腫瘤組織中的表達情況;
　　2.構建Legumain表達質粒和基因敲除質粒，應用細胞劃痕試驗，檢測在Legumain過表達和基因敲除的情況下對胃癌細胞遷移的影響;
　　3.應用Legumain表達質粒和基因敲除質粒轉染胃癌細胞，檢測對MMP-2表達的影響;
　　4.構建腺病毒感染的Legumain穩(wěn)轉

3、株，并構建裸鼠胃癌原位模型，分別檢測在應用Legumain抑制劑AEPI治療和過表達Legumain兩種情況下對裸鼠胃癌生長和轉移的影響;
　　5.應用189例胃腺癌病人組織芯片，進行免疫組織化學染色，分析Legumain和MMP-2在腫瘤起源、侵襲前緣及轉移灶的表達，并分析Legumain和MMP-2在三種不同來源腫瘤組織中表達的相關性，同時進行K孕plan-Meier生存期分析。
　　[結果]
　　1.Leguma

4、in在胃癌腫瘤組織中的表達水平高于在癌旁組織的表達;
　　2.在胃癌細胞系中過表達Legumain可以促進胃癌細胞的遷移;敲除Legumain可以減弱胃癌細胞的遷移;
　　3.在胃癌細胞系中過表達Legumain能夠使active-MMP-2表達增高;
　　4.動物實驗結果顯示，過表達Legumain組的荷瘤裸鼠，胃腫瘤的重量顯著高于對照組(p=0.0026)，肝臟表面腫瘤轉移灶的數(shù)量顯著高于對照組(p=0.0001)

5、;AEPI治療組的荷瘤裸鼠，胃腫瘤的重量顯著低于對照組(p=0.0016)，肝臟表面腫瘤轉移灶的數(shù)量顯著低于對照組(p=0.0462);
　　5.組織芯片免疫組織化學染色顯示，Legumain在癌旁組織中低表達甚至不表達，而在腫瘤起源、侵襲前緣和腫瘤轉移灶中表達較高;Legumain在胃腺癌腫瘤起源中的表達與腫瘤大小有關，p值小于0.01;Legumain在胃腺癌腫瘤侵襲前緣的表達與腫瘤大小有關（p值小于0.01），與淋巴結轉移有

6、關(p=0.025);Legumain在胃腺癌腫瘤轉移灶的表達與腫瘤大小有關，p值小于0.01;Legumain與MMP-2的表達在起源、侵襲前緣和轉移灶中有相關性，p值小于0.01;Legumain在腫瘤起源的表達與胃腺癌病人術后生存期有相關性，p值小于0.0001;Legumain和MMP-2在腫瘤起源中的協(xié)同表達與胃腺癌病人術后生存期有關，p值小于0.0001。
　　[結論]
　　1.Legumain在胃腺癌病人中高表