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文檔簡介
1、目的:
研究FAK基因沉默后裸鼠胃癌模型體內(nèi)腫瘤生長及轉(zhuǎn)移的變化。
方法:
培育SGC-7901細(xì)胞(空白對(duì)照組);轉(zhuǎn)染FAK-shRNA慢病毒載體的SGC-7901細(xì)胞(干擾實(shí)驗(yàn)組);轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照shRNA慢病毒載體的SGC-7901細(xì)胞(陰性對(duì)照組);在G418濃度為600ug/ml的條件下篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株;體外用Western Blot方法檢測三組細(xì)胞FAK蛋白的表達(dá);將裸鼠隨機(jī)分為6組,采用
2、三組細(xì)胞反復(fù)傳代,接種到裸鼠體內(nèi),各建立人胃癌裸鼠皮下移植模型和原位移植模型,觀察裸鼠體內(nèi)腫瘤生長及轉(zhuǎn)移情況;用RT-PCR,免疫組織化學(xué)染色檢測瘤體FAK的表達(dá)情況。
結(jié)果:
1.Western Blot檢測,干擾實(shí)驗(yàn)組FAK蛋白較陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組明顯減少。
2.裸鼠皮下移植腫瘤生長大小:干擾實(shí)驗(yàn)組(1.474±0.9840g)與陰性對(duì)照組(3.134±0.3299g)、空白對(duì)照組(2.687±0.
3、3827)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;裸鼠原位腫瘤模型體內(nèi)轉(zhuǎn)移情況:干擾實(shí)驗(yàn)組肝臟轉(zhuǎn)移1只,無腹腔轉(zhuǎn)移;陰性對(duì)照組肝臟轉(zhuǎn)移6只,腹腔轉(zhuǎn)移4只;空白對(duì)照組肝臟轉(zhuǎn)移5只,腹腔轉(zhuǎn)移4只;干擾實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
3.瘤體RT-qPCR檢測,干擾實(shí)驗(yàn)組FAK的mRNA明顯低于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組。
結(jié)論:
1.FAK-shRNA
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