Peroxynitrite誘導(dǎo)下咽癌細(xì)胞凋亡與PDCD4,DDR1及DDR2基因活性相關(guān)性研究.pdf

1、Peroxynitrite(ONOO)是一氧化氮和超氧陰離子的反應(yīng)產(chǎn)物。ONOO-作為強(qiáng)氧化劑，參與體內(nèi)一系列病理生理過(guò)程。在病理?xiàng)l件下，NO過(guò)量產(chǎn)生的細(xì)胞毒作用主要?dú)w咎于ONOO-的形成。ONOO-可通過(guò)不同的信號(hào)途徑影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。事實(shí)上，ONOO-可以穿透雙層磷脂膜，誘導(dǎo)脂質(zhì)過(guò)氧化，干擾線粒體的功能，影響細(xì)胞的代謝，進(jìn)而損傷DNA，引起包括腫瘤細(xì)胞在內(nèi)的各種細(xì)胞的壞死和/或凋亡。下咽癌，是頭頸部最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)

2、其發(fā)生率呈顯著上升趨勢(shì)。盡管治療手段的進(jìn)步在一定程度上改善了患者的生命質(zhì)量，但多年來(lái)患者總體生存率未有明顯提高。因此，探討新的腫瘤相關(guān)基因，揭示下咽癌發(fā)生的分子機(jī)制，有助于產(chǎn)生新的有效治療策略。
　　 PDCD4是近年來(lái)備受關(guān)注的一種程序性細(xì)胞死亡調(diào)控基因，也是一種抑癌基因。PDCD4位于染色體10q24上，其表達(dá)產(chǎn)物與真核細(xì)胞翻譯起始因子e IF4A結(jié)合.從而抑制核糖體復(fù)合物的形成和蛋白質(zhì)的合成。PDCD4在正常組織中普遍表達(dá)

3、，而在惡性腫瘤中表達(dá)下調(diào)甚至缺失。PDCD4在腫瘤組織中的低表達(dá)狀態(tài)與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。值得關(guān)注的是，在一些細(xì)胞的凋亡過(guò)程中,PDCD4表達(dá)增高。迄今為止，ONOO-誘干預(yù)條件下，PDCD4在FaDu細(xì)胞（下咽癌細(xì)胞系）表達(dá)狀況的研究鮮有報(bào)道。
　　 盤(pán)狀結(jié)構(gòu)域受體(Discoidin Domain receptors，DDRs)是最近發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)帶有盤(pán)狀結(jié)構(gòu)域的跨膜受體型酪氨酸激酶，包括DDR1和DDR2兩種亞型存

4、在。DDR1主要在一些腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，而DDR2主要表達(dá)于心、骨骼肌、肺、腦和腎的間質(zhì)細(xì)胞。本課題從PDCD4和盤(pán)狀結(jié)構(gòu)域受體(Discoidin domain receptor， DDRs)的表達(dá)為切入點(diǎn)，探討ONOO-對(duì)FaDu細(xì)胞的作用及機(jī)制。
　　 在本實(shí)驗(yàn)中，以不同濃度的ONOO-作用于體外培養(yǎng)的FaDu細(xì)胞，采用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡率，采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法測(cè)定細(xì)胞生存率。以吖啶橙和Ho33342熒光染色觀察

5、細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。采用Western-blot技術(shù)檢測(cè)PDCD4、DDR1、DDR2蛋白的表達(dá)。采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)PDCD4、DDR1、DDR2mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果顯示：
　　 (1)ONOO-顯著抑制FaDu細(xì)胞細(xì)胞增殖。
　　 (2)ONOO-主要通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制FaDu細(xì)胞增殖。
　　 (3)ONOO-作用下，F(xiàn)aDu細(xì)胞PDCD4 mRNA及蛋白水平增加顯著。
　　 (4

6、)ONOO-作用下，F(xiàn)aDu細(xì)胞DDR1mRNA及蛋白水平總體上呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。
　　 (5)在ONOO-作用下，F(xiàn)aDu細(xì)胞中的DDR2 mRNA及蛋白水平總體上呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。
　　 結(jié)論：
　　 ONOO-主要通過(guò)啟動(dòng)凋亡途徑有效抑制FaDu細(xì)胞增殖。在ONOO-誘導(dǎo)FaDu細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中，PDCD4及DDR1、DDR2基因可能起到關(guān)鍵性作用。本研究從一個(gè)側(cè)面，為揭示下咽癌與氧化脅迫的關(guān)系提供了實(shí)驗(yàn)依