HSP70基因與馬內(nèi)菲青霉致病性相關分析.pdf

1、中山大學碩士學位論文HSP70基因與馬內(nèi)菲青霉致病性相關分析姓名：黃庚史申請學位級別：碩士專業(yè)：皮膚病與性病學指導教師：張軍民20060501HSP70基因與馬內(nèi)菲青霉致病性相關分析摘要熱體克蛋白(heatshockproteins)是細胞在熱、寒冷、缺氧等環(huán)境壓力作用下所產(chǎn)生的一組蛋白質(zhì)。它們存在于任何生物的細胞中，可保護細胞不受或少受環(huán)境壓力的傷害作用。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種HSP，根據(jù)蛋白序列同源性和分子量大小，主要分為HSPl00、H

2、SP90、HSP70、HSP60及小HSP五個家族，而其中HSP70是最保守、最豐富、也是研究最深入的一種。各種生物的HSP70及其編碼基因均具有進化上的高度保守性，不同來源的真核生物其HSP70的同源性為60％～78％。除了熱休克反應，熱休克蛋白也是細胞正常功能所必需的一種蛋白，而且參與多種疾病的發(fā)生，例如癌癥、心臟病、糖尿病和自身免疫性疾病。其作用機制主要是起“分子伴侶”作用。能介導細胞內(nèi)多種蛋白的折疊過程，包括新合成蛋白質(zhì)的折疊和

3、裝配、錯折疊和凝集蛋白的二次折疊、細胞器間的膜轉(zhuǎn)位、外分泌和控制調(diào)節(jié)蛋白的活性。多種病原體包括細菌、寄生蟲等感染宿主后，對新的生存環(huán)境進行適應，會出現(xiàn)形態(tài)分化并可能伴有熱休克蛋白的產(chǎn)生。馬內(nèi)菲青霉從外界進入人體后，環(huán)境溫度升高，引發(fā)形態(tài)轉(zhuǎn)化，可能會導致熱休克反應。從而提高真菌對環(huán)境壓力的抵抗力，確保其在體內(nèi)的存活，增強其致病性。因此，有必要探索其在兩相轉(zhuǎn)化下的hsp70基因表達情況。二研究目的初步探討馬內(nèi)菲青霉雙相轉(zhuǎn)化中hsp70基因轉(zhuǎn)

4、錄、蛋白表達變化情況。三材料與方法1菌株：我院真菌研究中心保存的0152株。2真菌培養(yǎng)：保存菌種用Sabouraud固體培養(yǎng)基25。C斜面培養(yǎng)，每30天接種傳代一次。用于雙相轉(zhuǎn)化研究時，菌絲相在25。CSabouraud液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)72h后收集：37。C腦心浸液固體培養(yǎng)基培養(yǎng)誘導酵母相出現(xiàn)后再轉(zhuǎn)種37℃腦心浸液液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)72h后收集。3逆轉(zhuǎn)錄PCR：使用Trizol試劑提取總RNA。利用設計好的hsp70引物，以總eDNA