甘草酸二苦參堿鹽和甘草酸二氧化苦參堿鹽的制備、保肝活性及在體腸吸收.pdf

1、甘草酸(glycyrrhizin，glycyrrhizic acid，GL)，是中藥甘草(Glycyrrhizia glabra.L.)的主要有效成分之一，屬三萜皂苷類，可水解生成甘草次酸(GA)和兩分子葡萄糖醛酸。研究表明甘草酸在抗炎，降脂，抗?jié)?，抗病毒和免疫調(diào)節(jié)等方面有很好的藥理作用，并對(duì)多種蛋白激酶有抑制作用，臨床在治療慢性肝病方面有廣泛的應(yīng)用。甘草酸以C<,18>-H兩種差向異構(gòu)體存在(α-GL與β-GL)，β-GL型為甘草中

2、的主要成分，在一定條件下可以轉(zhuǎn)化為α體。兩者理化性質(zhì)相近，由于立體結(jié)構(gòu)與配體親和力強(qiáng)，因此18a-GL的藥理活性強(qiáng)于18β-GL。 但是甘草酸分子由于親水性較強(qiáng)，不易通過(guò)腸道上皮細(xì)胞脂質(zhì)膜，因此不易經(jīng)過(guò)跨上皮細(xì)胞途徑(transcellular route)吸收；加之其分子量較大，不易隨水分通過(guò)細(xì)胞旁路(paracellular route)吸收，導(dǎo)致生物利用度比較低。并有水鈉潴留，低血鉀，高血壓、假性醛固酮增多癥等副作用，不利

3、于長(zhǎng)期用藥。 因此以甘草酸以及甘草次酸為先導(dǎo)化合物進(jìn)行機(jī)構(gòu)修飾的例子很多，多為母體的還原，母體上的羧基或羥基及糖醛酸的羧基反應(yīng)(成酯、成酰氨、成脲、成氨基甲酯、成糖肽等)。另外甘草酸與抗生素、纖維素、生物堿類都可生成復(fù)鹽，復(fù)合后有的可使藥理作用加強(qiáng)，有的可使活性提高，毒副作用降低，還有的可產(chǎn)生新的藥理作用。 本課題用甘草酸與有抗肝纖維化，保護(hù)細(xì)胞膜，抗腫瘤作用的苦參堿(氧化苦參堿)反應(yīng)，制備工藝簡(jiǎn)單，獲得了質(zhì)量可

4、控的化合物：甘草酸二苦參堿鹽(GM)和甘草酸二氧化苦參堿鹽(GO)。形成的一分子鹽中含一分子的甘草酸和兩分子的生物堿，二者均為白色粉末狀固體。以甘草酸分子中PKa較小的葡萄糖醛酸的兩個(gè)羧基分別與苦參堿(MT)或氧化苦參堿(OMT)成鹽，成鹽后水溶性良好，可以明顯的改善甘草酸遇水凝膠化的情況，運(yùn)用IR，UV，NMR等多種圖譜對(duì)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。以小鼠四氯化碳急性肝損傷模型，考查甘草酸成鹽后的保肝效果，灌胃給藥，12.5-50mg/KgG

5、M可以明顯的降低CCl<,4>致小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶ALT，AST的升高(p<0.01)，使肝指數(shù)趨于正常。25-100mg/KgGO，可以降低血清ALT，AST(p<0.01)，改善肝指數(shù)，上調(diào)自由基清除劑超氧化物歧化酶(SOD)還原型谷光甘肽(GSH)的活力，改善肝組織病理狀況，減少壞死灶，抑制肝細(xì)胞腫大，減少匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。但GO效果與氧化苦參堿(OMT)沒(méi)有明顯差別。 以CCl<,4>和H<,2>O<,2>損傷人胚胎肝細(xì)胞

6、株LO2，給予50uM的GM、GO可以明顯的提高細(xì)胞活力(p<0.01)，降低細(xì)胞培養(yǎng)上清中的LDH滲出及細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化MDA的量，提高細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶SOD的活力(p<0.01)，但是效果和單用等摩爾濃度的甘草酸及苦參堿或者氧化苦參堿沒(méi)有顯著性差異。 以大鼠原位二步膠原酶灌流法，制備大鼠肝原代細(xì)胞，以D-氨基半乳糖(D-GaIN)(5mM，48h)損傷大鼠肝原代細(xì)胞。D-GaIN損傷被認(rèn)為是與人病毒性肝炎特征最相近的藥物

7、損傷模型。50uM給藥后，GM、GO可以顯著提高肝細(xì)胞的存活率(p<0.01)，降低上清液中ALT及LDH的量，減少細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA的產(chǎn)生，提高SOD活力，增加自由基清除劑GSH的量。但是效果與單用苦參堿或者氧化苦參堿沒(méi)有顯著性差異。 GM與GO對(duì)多種毒物損傷的肝細(xì)胞均有保護(hù)作用，說(shuō)明它們可直接作用于肝細(xì)胞損傷的下游環(huán)節(jié)，如脂質(zhì)過(guò)氧化、細(xì)胞膜破裂等。作用比成鹽前沒(méi)有明顯的提高可能因?yàn)楦什菟崤c苦參堿作用于肝細(xì)胞的機(jī)制相似

8、，在受體、酶等飽和的情況下，加大用量作用沒(méi)有提高。 以大鼠在體單向腸灌流模型(SPIP)和HPLC定量，考查GO在大鼠腸道內(nèi)的吸收動(dòng)力學(xué)，結(jié)果表明，鹽中只有苦參堿被吸收而甘草酸吸收很少?？刹糠纸忉屝∈驝Cl<,4>急性肝損傷模型中灌胃給藥GO和OMT組沒(méi)有顯著性差別的原因。 綜上，甘草酸與苦參堿(氧化苦參堿)成鹽后，肝細(xì)胞保護(hù)作用沒(méi)有明顯的降低，但是效果較成鹽前沒(méi)有顯著的提高。成鹽后甘草酸的胃腸道吸收沒(méi)有增加，但是成鹽