核因子κB抑制劑PDTC對(duì)腦死亡豬腎臟免疫原性的影響.pdf

1、腎移植是治療終末期腎病的最有效方法。然而，全國(guó)可供移植的器官只能滿足10％～20％的患者需要。供腎來(lái)源短缺使得很多終末期腎病患者只能靠血液透析維持生命，約一半需要腎移植的病人在等待供體的過(guò)程中死亡。利用腦死亡供體器官進(jìn)行移植是緩解器官來(lái)源短缺的有效手段。但研究顯示在人類白細(xì)胞抗原相容的前提下，活體非親屬供者腎臟3年存活率達(dá)80％以上，腦死亡供者僅為70％?；铙w非親屬供腎移植，與腦死亡供者比較，無(wú)論手術(shù)技術(shù)、治療方法以及遺傳背景上都沒(méi)有明

2、顯優(yōu)勢(shì)，但其效果要優(yōu)于腦死亡者，推測(cè)腦死亡在其中發(fā)揮了極為重要的作用。有報(bào)道顯示腦死亡后腎臟主要組織相容性抗原-Ⅱ(majorhistocompatibility antigen-Ⅱ．MHC-Ⅱ)表達(dá)升高，腎臟免疫原性明顯增強(qiáng)，有利于受體免疫系統(tǒng)的識(shí)別，更易于與宿主產(chǎn)生免疫應(yīng)答，發(fā)生排斥反應(yīng)。核因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)是一種具有多向性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的轉(zhuǎn)錄因子，控制著多種炎癥和免疫相關(guān)基因的表達(dá)

3、，被認(rèn)為是調(diào)控機(jī)體炎癥反應(yīng)的總源頭。VanDer Hoeven等人研究發(fā)現(xiàn)大鼠腦死亡時(shí)‘腎臟組織NF-κB表達(dá)增高，同時(shí)其調(diào)控的免疫相關(guān)基因如黏附分子等表達(dá)也增高，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)增加，腎臟發(fā)生炎性損傷。吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)是對(duì)NF-KB活性有強(qiáng)烈抑制作用的一種抗氧化劑。近年來(lái)，在急性暈癥胰腺炎、器官缺血再灌注損傷等動(dòng)物模型中都發(fā)現(xiàn)其通過(guò)抑制NF-κB的活性而發(fā)揮對(duì)器官的

4、保護(hù)作用。但腦死亡后腎臟免疫原性增強(qiáng)的機(jī)制是什么，它與NF-κB的活化是否有關(guān)，日前文獻(xiàn)尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。探討這些問(wèn)題對(duì)于改善腎臟移植的效果，提高腎臟移植的水平有重要意義。本實(shí)驗(yàn)擬應(yīng)用間斷緩慢顱內(nèi)加壓法制作豬腦死亡模型，并應(yīng)用PDTC進(jìn)行干預(yù)，通過(guò)觀察腦死亡狀態(tài)下PDTC干預(yù)前后腎臟免疫原性的改變，探討NF-KB在腦死亡腎臟免疫原性改變中可能發(fā)揮的作用，為臨床腎移植過(guò)程中通過(guò)降低腦死亡供體腎臟免疫原性進(jìn)而提高移植存活率提供理論依據(jù)。

5、 目的；通過(guò)檢測(cè)腦死亡狀態(tài)下應(yīng)用NF-KB抑制劑PDTC前后豬腎臟組織NF-KB、MHC-Ⅱ水平變化，探討NF-KB在腦死亡后。腎臟免疫原性改變中的作用，為臨床中通過(guò)降低腦死亡供體腎臟免疫原性進(jìn)而提高移植存活率提供理論依據(jù)。 方法；健康長(zhǎng)白豬18頭，雌雄不限，隨機(jī)分為3組，即對(duì)照組(C組)、腦死亡組(B組)和保護(hù)組(P組)，每組6頭。應(yīng)用改進(jìn)的緩慢間斷顱內(nèi)加壓法建立腦死亡模型，通過(guò)呼吸及循環(huán)支持維持豬腦死亡狀態(tài)24小時(shí)。B組和

6、P組動(dòng)物于腦死亡建成后6、12和24h取血清及腎下極組織，ELISA法檢測(cè)血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平變化；實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR)法檢測(cè)腎臟組織NF-KB mRNA水平變化；免疫組化法觀察NF-KB p65亞基及MHC-Ⅱ分子DR位點(diǎn)蛋白表達(dá)的變化；光鏡下觀察腎臟組織結(jié)構(gòu)的變化。C組僅行顱內(nèi)置管，不建立腦死亡，分別于上述各對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)留取血清和腎臟組

7、織檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)變化。 結(jié)果 1．血清炎癥因子變化在6、12、24h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，C組血清TNF-α水平分別為11.01±0.90、10.54±0.63和10.95±0.76pg/ml，IL-1β水平分別為4.80±0.50、4.89±0.49和4.98±0.45pg/ml，IL-6水平分別為11.55±0.79、11.34±0.84和11.53±0.57pg/ml；B組血清TNF-α水平分別為20.21±1.12、25.1

8、6±1.04和34.99±0.88pg/ml，IL-1β水平分別為10.93±0.76、14.80±0.68和18.01±1.02pg/ml，IL-6水平分別為17.08±0.83、25.29±1.47和34.10±2.05pg/ml；P組血清TNF-α水平分別為15.68±0.77、21.52±0.58和29.44±1.51pg/ml，IL-1β水平分別為8.00±0.64、11.27±0.77和14.30±0.46pg/ml，IL-

9、6水平分別為14.23±0.67、19.43±1.29和24.77±1.52pg/ml。C組各時(shí)間點(diǎn)之間血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平各自比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)：B組及P組組內(nèi)TNF-α、IL-1β、IL-6分別進(jìn)行后一時(shí)間點(diǎn)與前一時(shí)間點(diǎn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；各對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)TNF-α、IL-1β、IL-6分別進(jìn)行組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 死亡時(shí)間延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，提示腦