油茶蒲減肥降脂功能因子研究.pdf

1、油茶(Camellia oleifera Abel.)是我國重要的木本油料作物,在我國有一千多年的種植歷史。山茶油富含不飽和脂肪酸,具有很高的營養(yǎng)價值,被譽(yù)為“東方橄欖油”。油茶蒲為油茶果的外種皮,占油茶果濕重的60％,但是目前利用率極低。本論文對油茶蒲中的活性物質(zhì)進(jìn)行分離鑒定,并對其減肥降脂作用進(jìn)行系統(tǒng)研究。主要研究結(jié)論如下:
　　 (1)用50％的乙醇-水溶液熱回流提取得到油茶蒲提取物(OCE),采用高速逆流色譜直接從油茶蒲

2、提取物中分離制備獲得3個化合物單體,通過紅外光譜、紫外光譜、質(zhì)譜、核磁等技術(shù)鑒定其分別為沒食子酸(GA)、鞣花酸(EA)和3-0.甲基鞣花酸-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖(MEAG)。
　　 (2)高效液相色譜測得OCE中GA、EA、MEAG的含量分別為3.67、3.20、5.58 mg/g。采用鹽酸水解和大孔樹脂吸附-解析法對OCE進(jìn)行處理,酸水解產(chǎn)物中GA和EA含量分別為OCE的18倍和4倍,D101大孔樹脂的40％乙醇洗脫

3、物中MEAG的含量是OCE的2.7倍。
　　 (3)采用脂肪酸合酶(FAS)抑制的體外評價體系,測得OCE、EA和MEAG對FAS的半抑制濃度(IC50)分別為2.30、2.50和37.73μg/mL·FAS抑制動力學(xué)研究表明,OCE對底物A-CoA為競爭性抑制,對M-CoA、NADPH均為混合性(競爭性-非競爭性)抑制。EA和MEAG對M-CoA和NADPH的抑制類型均為混合性抑制和反競爭性抑制。對底物A-CoA而言,EA和M

4、EAG分別為混合性抑制和競爭性抑制。表明EA和MEAG主要通過作用于酰基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域,或特異性結(jié)合FAS-NADPH而使FAS失活。
　　 (4)采用3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖抑制試驗,對油茶蒲中分離得到的活性化合物進(jìn)行功能評價,表明GA能顯著抑制前脂肪細(xì)胞增殖,250μM給藥24 h,對前脂肪細(xì)胞的增殖抑制率達(dá)66.5％:通過觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化,發(fā)現(xiàn)OCE、GA、EA及MEAG均對前脂肪細(xì)胞的分化有抑制作用,并能

5、減少脂肪細(xì)胞中的甘油三酯(TG)含量;同時,發(fā)現(xiàn)MEAG有促進(jìn)成熟脂肪細(xì)胞中脂肪分解的作用,10μM的劑量即能顯著促進(jìn)脂肪細(xì)胞釋放甘油。
　　 (5)采用預(yù)防型小鼠肥胖試驗?zāi)Ｐ?通過對高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠分別給予100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg OCE和100 mg/kg GA,結(jié)果顯示:OCE對小鼠的減肥作用呈劑量依賴關(guān)系,100 mg/kg的OCE即能顯著降低試驗小鼠的體重增長率(P＜0.05);20

6、0 mg/kg OCE對血脂和體重有較全面的作用,能夠顯著降低小鼠血清TC、TG,提高HDL-C,降低附睪和腎周脂肪,提高肝臟中SOD的活性,降低肝臟中的FAS活性,減輕肝臟脂滴積累作用。100 mg/kgGA能顯著降低小鼠體重增長率、血清中的TC含量,減少腎周脂肪。降低肝臟FAS活性和MDA含量,減輕肝臟脂滴積累作用,提高肝臟中SOD的活性。
　　 (6)采用治療型小鼠肥胖試驗?zāi)Ｐ?通過對肥胖小鼠分別灌胃100、200、400

7、 mg/kg OCE和100 mg/kg GA,結(jié)果顯示200 mg/kg、400 mg/kg OCE能顯著減輕高脂膳食誘導(dǎo)的肥胖小鼠體重,分別在第24天和第10天與模型組達(dá)到顯著性差異。400 mg/kg的OCE對肥胖小鼠表現(xiàn)出較全面的減肥降脂作用,能夠顯著降低肥胖小鼠體重以及血清中的TC、TG含量,降低腎周、附睪脂肪以及肝臟中的MDA含量和FAS活性。而100 mg/kg GA對肥胖小鼠的治療效果不明顯。
　　 (7)安全性

8、評價試驗表明,油茶蒲提取物油大、小鼠經(jīng)口急性毒性最大耐受量(MTD)均大于20.0 g/kg體重,屬無毒級。Ames試驗、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗和小鼠精子畸形實驗結(jié)果均為陰性,表明油茶蒲提取物無致突變性。慢性毒性試驗顯示,經(jīng)口給予大鼠0、0.5、1.0、2.0 g/kg油茶蒲提取物30 d,未見實驗動物出現(xiàn)中毒癥狀,大體解剖及組織學(xué)觀察未見異常病理改變,并且大鼠體重、進(jìn)食量、食物利用率、血常規(guī)、血生化、臟體比等均無明顯改變,表明油茶蒲提取