固相萃取RP-HPLC法與AxSYM法測(cè)定全血環(huán)孢素及其相關(guān)性研究.pdf

1、目的：1.建立全血環(huán)孢素濃度的固相萃取-反相高效液相色譜測(cè)定法。 2.研究固相萃取-反相高效液相色譜法和AxSYM法測(cè)定環(huán)孢素血藥濃度結(jié)果的差異及相關(guān)性。 方法： 1.固相萃取-反相高效液相色譜法：含藥全血樣品經(jīng)處理后，注入HPLC系統(tǒng)分析。色譜條件：色譜柱：Shim-Pack C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈：水(76:24，v/v)；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；溫度：68℃；流速：1.0mL·

2、min-1；進(jìn)樣量：50μL。 2.AxSYM法：同一樣品按規(guī)定程序(采用專屬試劑盒)處理后，注入AxSYM系統(tǒng)分析。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：(1)對(duì)固相萃取-反相高效液相色譜法和AxSYM法測(cè)定全血環(huán)孢素濃度的結(jié)果配對(duì)t檢驗(yàn)，判定兩法測(cè)定值是否一致。(2)以RP-HPLC法測(cè)定值為自變量X以AxSYM法測(cè)定值為因變量Y，進(jìn)行線性回歸分析，建立一元線性回歸模型，評(píng)價(jià)兩者的相關(guān)性。 結(jié)果： 1.固相萃取-反相高效

3、液相色譜法測(cè)定全血環(huán)孢素的濃度：標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=370.4C+4771.5(r=0.9999，n=6)，線性范圍50～1000ng·mL-1；方法回收率94.71％～98.52％，RSD<4％(n=5)；日內(nèi)RSD<2％、日間RSD<7％(n=5)；最低檢測(cè)限30ng·mL-1(S/N≥3)。共測(cè)定100人份患者全血環(huán)孢素樣本。 2.AxSYM法：測(cè)定100人份患者全血環(huán)孢素樣本。 3.采用SPSS10.0軟件處理測(cè)定

4、數(shù)據(jù)。對(duì)100人份患者環(huán)孢素血樣的測(cè)定結(jié)果顯示，采用AxSYM分析儀所測(cè)得的血藥濃度值較固相萃取-反相高效液相色譜法明顯偏高，CAxSYM/CRP·HPLC=1.31±0.27(n=100)。經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，結(jié)果表明，RP-HPLC法與AxSYM法所獲得的環(huán)孢素的血藥濃度測(cè)定結(jié)果存在顯著差異(P<0.001)。以RP-HPLC法測(cè)定值為自變量X，以AxSYM法測(cè)定值為因變量Y，可得一元線性回歸模型：(^Y) AxSYM=0.958XRP-

5、HPLC+48.966，判定系數(shù)r2=0.9433。相關(guān)分析表明，RP-HPLC法與AxSYM法測(cè)定值之間呈顯著正相關(guān)關(guān)系，r=0.971，P<0.001。另對(duì)模型中的回歸系數(shù)行t檢驗(yàn)，結(jié)果表明，回歸系數(shù)有高度顯著性(P<0.001)，因此可確認(rèn)RP-HPLC法與AxSYM法測(cè)定值之間存在線性關(guān)系，且按照上述模型用給定的自變量XRP-HPLC值估計(jì)因變量YAxSYM值是有效可行的。 結(jié)論： 1.固相萃取-反相高效液相色譜

6、法測(cè)定患者全血環(huán)孢素濃度，方法準(zhǔn)確，靈敏度高，重現(xiàn)性好，測(cè)定結(jié)果可靠，適用于環(huán)孢素血藥濃度監(jiān)測(cè)。 2.AxSYM法測(cè)定患者全血環(huán)孢素濃度，方法簡(jiǎn)便、迅速，自動(dòng)化程度高，樣品需求量少，靈敏性好，適用于臨床環(huán)孢素血藥濃度常規(guī)監(jiān)測(cè)。 3.固相萃取-反相高效液相色譜法的測(cè)定值較AxSYM測(cè)定方法的測(cè)定值明顯偏低，但二者具有顯著相關(guān)性，通過(guò)線性回歸預(yù)測(cè)模型，可由RP-HPLC法的測(cè)定值估算出AxSYM法的預(yù)測(cè)值，這有助于臨床醫(yī)師了