負(fù)載RPL8蛋白的DC疫苗抑制乳腺癌生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 制備負(fù)載RPL8蛋白的DC疫苗，觀察DC疫苗對(duì)小鼠乳腺癌的療效，并探討其抑制乳腺癌生長(zhǎng)的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.根據(jù)Gene Bank提供的RPL8的mRNA序列設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增RPL8基因，與載體酶切、連接，構(gòu)建pET28a(+)-RPL8重組質(zhì)粒。
　　 2.構(gòu)建好的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE3)中，接種到含Kan的LB培養(yǎng)液中，37℃震蕩培養(yǎng)4h，加入IPTG

2、至終濃度1mmol/l，30℃，80rpm，震蕩搖6h，并取菌液進(jìn)行SDS-PAGE和Western Blot。
　　 3.制備好的RPL8蛋白沖擊DC，熒光顯微鏡下觀察DC負(fù)載RPL8蛋白情況。
　　 4.負(fù)載RPL8蛋白的DC培養(yǎng)48h與尼龍毛柱子分離的小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞按不同的比例混合，繼續(xù)培養(yǎng)72h，分別以不同效靶比加入到4T1細(xì)胞中培養(yǎng)48h，酶標(biāo)儀測(cè)定其OD值。
　　 5.將負(fù)載RPL8蛋白的DC疫苗

3、注射入荷瘤小鼠體內(nèi)，觀察乳腺癌腫瘤體積變化及小鼠的生存時(shí)間與瘤體的組織病理變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.經(jīng)酶切及測(cè)序鑒定，重組質(zhì)粒含有大約6124bp的片段，序列與gene bank一致，成功構(gòu)建了攜帶RPL8基因的重組質(zhì)粒。
　　 2.含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌BL21經(jīng)誘導(dǎo)后表達(dá)約28KD的蛋白，經(jīng)SDS-PAGE和Western blot鑒定，獲得目的蛋白。
　　 3.RPL8蛋白與DC混合培養(yǎng)后，經(jīng)

4、熒光顯微鏡觀察，可見細(xì)胞內(nèi)有熒光顆粒。
　　 4.負(fù)載RPL8蛋白的DC疫苗體外殺傷4T1乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性與未負(fù)載RPL8蛋白的DC及PBS組比較，差異有顯著性(p＜0.05)。
　　 5.負(fù)載RPL8蛋白的DC疫苗，注入荷瘤小鼠體內(nèi)后，治療組的小鼠生存期和小鼠的腫瘤體積變化較對(duì)照組有顯著性差異(p＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 負(fù)載RPL8蛋白的DC疫苗對(duì)小鼠乳腺癌具有免疫治療作用，為乳腺癌的