左旋-1-甲基色氨酸聯(lián)合DC疫苗抗乳腺癌免疫效應的研究.pdf

1、目的：
　　確定小鼠乳腺癌細胞4T1抗原致敏的樹突狀細胞（DC）疫苗，在體內外抗腫瘤免疫的效應；探討吲哚-2,3-雙加氧酶(IDO)化學抑制劑左旋-1-甲基色氨酸（L-1-MT）聯(lián)合DC疫苗治療對荷乳腺癌小鼠腫瘤引流淋巴結（TDLN）中IDO表達水平的抑制程度及其增強荷瘤小鼠腫瘤免疫應答的機制。
　　方法：
　　1、體外培養(yǎng)BALB/c小鼠骨髓來源的DC，用小鼠乳腺癌細胞4T1凍融抗原致敏來制備腫瘤特異性DC疫苗。流式

2、細胞儀檢測DC成熟表型；混合淋巴細胞反應（MLR）檢測DC刺激T淋巴細胞增殖能力；以4T1為靶細胞，DC致敏的T細胞為效應細胞檢測細胞毒性T淋巴細胞（CTL）體外特異性殺瘤效應。
　　2、雌性BALB/c小鼠于第四脂肪墊下接種乳腺癌細胞4T11×105 cell/只建立荷瘤小鼠模型。荷瘤小鼠隨機分成對照組，DC疫苗組，L-1-MT組，L-1-MT聯(lián)合DC疫苗組，分別給予生理鹽水、DC疫苗、L-1-MT、L-1-MT聯(lián)合DC疫苗治療

3、。測量腫瘤大小，描繪腫瘤生長曲線；于接種后第21d處死小鼠，取各組小鼠腫瘤組織，TDLN及脾臟；稱取腫瘤重量；Western blot測定TDLN中IDO表達水平，流式細胞儀檢測TDLN及脾臟中CD4+CD25+Foxp3+Tregs比例；MTT比色法檢測荷瘤小鼠體內T淋巴細胞特異性細胞毒作用。
　　結果：
　　1、4T1凍融抗原致敏的DC（4T1-DC）組表面共刺激分子CD40，CD80， CD86的表達明顯高于未致敏DC

4、（DC）組(P＜0.01)；4T1-DC具有更強的刺激T淋巴細胞增殖能力，在刺激細胞與效應細胞比例為1∶10時的刺激指數(shù)最高，4T1-DC組、DC組分別為8.45±0.24、6.56±0.29（P＜0.01）；在效應細胞與靶細胞比值為40∶1和20∶1時，4T1-DC組致敏的CTL體外特異性殺瘤效應均高于DC組分別為35.03±1.01、27.02±1.33和31.00±1.06、23.96±1.06（P＜0.01）。
　　2、接

5、種乳腺癌細胞4T1后的腫瘤生長曲線顯示：L-1-MT聯(lián)合DC疫苗組腫瘤生長速度最慢；第21天時的腫瘤體積和重量均為 CON組＞DC疫苗組＞L-1-MT組＞L-1-MT+DC組（P＜0.05）。L-1-MT+DC聯(lián)合治療組與CON組相比，抑瘤率為43％。
　　3、Western blot檢測各組 TDLN中 IDO相對表達量及流式細胞儀測定的TDLN與脾臟中 CD4+CD25+Foxp3+Tregs的比例均為 DC疫苗組＞CON組＞

6、L-1-MT+DC組＞L-1-MT組（P＜0.05）。
　　結論：
　　1.應用DC疫苗治療的荷乳腺癌小鼠TDLN中IDO表達明顯增高，且TDLN及脾臟CD4+CD25+Foxp3+Tregs的數(shù)量增多，這可能是影響乳腺癌免疫治療效果的重要因素之一。
　　2. L-1-MT可有效抑制荷乳腺癌小鼠體內IDO蛋白的表達，同時可以下調小鼠TDLN及脾臟內CD4+CD25+Foxp3+Tregs的數(shù)量，從而增強DC疫苗抗腫瘤效