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文檔簡介
1、在腫瘤免疫過程中,T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答起著主導(dǎo)作用,DCs是目前功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(APC),能刺激初始T淋巴細(xì)胞增殖,激發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答。由此,以DCs為基礎(chǔ)的腫瘤免疫治療越來越受到重視,并有較深入的研究。DCs攝取腫瘤抗原后從腫瘤部位到淋巴組織的遷移是有效激發(fā)抗腫瘤免疫反應(yīng)關(guān)鍵步驟。本研究嘗試通過使負(fù)載乳腺癌抗原DCs表面的CCR7表達(dá)上調(diào)或?qū)ε潴w的敏感性增強(qiáng),以期在DCs注入體內(nèi)后,能有效遷移到達(dá)淋巴組織,充分發(fā)揮乳腺癌DC
2、s疫苗的免疫治療作用。 1、增強(qiáng)負(fù)載乳腺癌抗原小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(BMDCs)遷移能力的體外實(shí)驗(yàn)研究 [目的]上調(diào)體外培養(yǎng)乳腺癌抗原負(fù)載的BMDCs表面CCR7表達(dá),觀察對(duì)其遷移能力和功能的影響。 [材料與方法]在體外以rmGM-CSF和rmIL-4誘導(dǎo)培養(yǎng)BALB/c小鼠BMDCs,負(fù)載乳腺癌抗原后,加入不同的刺激物培養(yǎng),觀察CCR7表達(dá)情況,并檢測(cè)表型及其功能的變化。 [結(jié)果]PGE2和LTC4組
3、BMDCs與DC對(duì)照組相比,CD86、CD80、CCR7陽性細(xì)胞百分率升高,而且CCR7mRNA和蛋白表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05),對(duì)CCL19或CCL21趨化遷移能力增強(qiáng)(P<0.05);Bryo-1組BMDCs與對(duì)照組相比,CD86、CD80表達(dá)水平上調(diào),CCR7mRNA表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05),但在CCR7蛋白表達(dá)和細(xì)胞遷移能力中未顯示出優(yōu)勢(shì)(P>0.05)。經(jīng)PGE2、LTC4及Bryo-1培養(yǎng)的BMDCs與對(duì)照組相比,對(duì)淋巴細(xì)胞的
4、增殖能力無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;激活的CTL細(xì)胞特異性殺傷活性不受影響,隨效靶比的增大,其殺傷乳腺癌細(xì)胞活性隨之增加。 [結(jié)論]PGE2和LTC4可以促進(jìn)BMDCs成熟,并通過CCR7mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào),增強(qiáng)其趨化遷移能力;而Bryo-1僅能促進(jìn)BMDCs成熟。 2、體外培養(yǎng)小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞體內(nèi)抗乳腺癌免疫治療作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究 [目的]觀察上調(diào)體外培養(yǎng)乳腺癌抗原負(fù)載的BMDCs表面CCR7表達(dá),在小鼠體內(nèi)對(duì)乳腺
5、癌免疫治療作用的影響。 [材料與方法]構(gòu)建BALB/c小鼠乳腺癌動(dòng)物模型,用體外誘導(dǎo)培養(yǎng)并負(fù)載乳腺癌抗原的各組BMDCs,接種治療,1×106個(gè)/只/周,連續(xù)4周,每周測(cè)量腫瘤大小。 [結(jié)果]根據(jù)腫瘤每周的平均體積變化情況,BMDCs治療各組腫瘤生長速度均比PBS對(duì)照組慢,經(jīng)PGE2和LTC4培養(yǎng)DC組抑制腫瘤生長的作用高于DC組(P<0.05),而Bryo-1組的抑制作用與DC組相似(P>0.05)。第8周種植腫瘤的重
6、量5組也有差異(P<0.05),PGE2和LTC4組平均腫瘤重量低于DC組(P<0.05)。 [結(jié)論]以PGE2或LTC4培養(yǎng)BMDCs可以提高乳腺癌DCs疫苗的功效,更好發(fā)揮免疫功能,作用機(jī)制可能是促進(jìn)BMDCs表面CCR7表達(dá),使其在體內(nèi)遷移能力增強(qiáng)。 3、調(diào)控負(fù)載乳腺癌抗原人外周血單核細(xì)胞來源DCs(MoDCs)的遷移能力[目的]體外培養(yǎng)乳腺癌抗原負(fù)載的人MoDCs,使其表面CCR7表達(dá)上調(diào),觀察其在體外遷移能力。
7、 [材料與方法]用rhGM-CSF和rhIL-4培養(yǎng)MoDCs,負(fù)載乳腺癌抗原后,分別加入PGE2、LTC4或Bryo-1培養(yǎng),檢測(cè)其表型及其功能變化。 [結(jié)果]體外實(shí)驗(yàn)顯示,3組不同培養(yǎng)條件,不影響MoDCs的刺激淋巴細(xì)胞增殖能力和自體特異性淋巴細(xì)胞殺傷活性。與對(duì)照組MoDCs相比,PGE2和LTC4組CD86表達(dá)增高,可以上調(diào)CCR7mRNA和蛋白表達(dá)(P<0.05)。體外趨化試驗(yàn)顯示,PGE2可以使MoDCs對(duì)其配
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