中藥黃芪提取物對體外高糖培養(yǎng)牛視網(wǎng)膜毛細血管周細胞影響的實驗研究.pdf

1、目的:1建立高糖體外培養(yǎng)牛視網(wǎng)膜毛細血管周細胞模型并觀察高糖對周細胞的影響;2初步探討利用體外細胞系進行藥物篩選成分的順序;3觀察中藥黃芪提取物及其成分對體外高糖培養(yǎng)牛視網(wǎng)膜毛細血管周細胞的影響.方法:1建立牛視網(wǎng)膜毛細血管周細胞(Pericyte,PC)體外常規(guī)培養(yǎng)模型.2將傳至第三代的周細胞用常規(guī)培養(yǎng)液制作細胞懸液、計數(shù)并接種于96孔培養(yǎng)板(或培養(yǎng)瓶)中,待細胞貼壁后,分組加入含不同葡萄糖濃度(5.5mmol/l、10mmol/l、

2、20mmol/l、30mmol/l、40mmol/l)的DMEM培養(yǎng)液,分別培養(yǎng)2d~8d后收集細胞,采用形態(tài)學觀察、MTT法、流式細胞儀檢測,研究高糖對周細胞的影響.3在體外高糖(20mmol/L)培養(yǎng)2d的周細胞中加入不同濃度的黃芪提取物及其成分,繼續(xù)培養(yǎng)2d,用噻唑蘭(Methyl thiazoly tetrazolium,MTT)比色法,測定每組的光密度值(OD值),根據(jù)OD值計算抑制率.4在體外高糖(20mmol/L)培養(yǎng)2d

3、的周細胞中加入0.4mg/ml的H<,20>,2d后收集細胞,用流式細胞儀測定凋亡細胞百分率.結(jié)果:1高糖10mmol/l培養(yǎng)4d、6d、8d組和高糖20mmol/l、30mmol/l、40mmol/l培養(yǎng)2d、4d、6d、8d組周細胞增殖均有明顯抑制作用,其抑制率以40mmol/l、8d組最高(P<0.01).2高糖10mmol/l、20mmol/l、30mmol/l、40mmol/l培養(yǎng)2d~8d均能促進周細胞的凋亡,其凋亡細胞的數(shù)

4、目以40mmol/l、8d組最多(P<0.01).3(1)HB1~9濃度組對高糖培養(yǎng)周細胞的增殖有促進作用,其OD值與空白對照組相比有顯著性差異(P<0.05).(2)H<,20>1~10濃度組對高糖培養(yǎng)周細胞的增殖有促進作用,其OD值與空白對照組相比有顯著性差異(P<0.05).4在周細胞以20mmol/l葡萄糖濃度培養(yǎng)48h后,加入0.4mg/ml的H<,2>0組的細胞凋亡百分率低于空白對照組和模型組(P<0.05).結(jié)論:1高糖對