左卡尼汀對體外高糖培養(yǎng)鼠視網(wǎng)膜Muller細胞的保擴作用及機制.pdf

1、目的:觀察體外培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜Müller細胞在高糖條件下細胞活性、活性氧(ROS)和線粒體膜電位(MMP)的變化，研究左卡尼汀(L-carnitine，LC)對其作用的影響，探討LC對Müller細胞的保護作用及機制。
　　 方法:取出生1-3天SD大鼠視網(wǎng)膜，反復胰酶消化法純化Müller細胞，進行GS、GFAP單標及雙標免疫熒光鑒定。用臺盼藍染色法觀察不同濃度葡萄糖對Müller細胞生長狀態(tài)及存活率的影響，確立高糖濃度。將M

2、üller細胞隨機分為正常對照組、高糖組和不同濃度LC處理組，LC處理組在高糖培養(yǎng)液中分別加入終濃度為50、100、200umol/L LC。MTT法檢測細胞活性，Hoechst33342染核檢測細胞凋亡，流式細胞儀檢測細胞內ROS和MMP的變化。
　　 結果:免疫熒光顯示，體外培養(yǎng)的細胞大部分抗GS、GFAP抗體反應陽性，該方法培養(yǎng)的Müller細胞純度可達90％以上。MTT結果顯示，高糖培養(yǎng)組細胞活性顯著下降（P＜0.05）

3、，LC處理后細胞活性上調，以100umol/L LC作用最佳。ROS檢測結果顯示，高糖損傷后細胞內ROS水平明顯高于正常對照組（P＜0.05），Lc處理后，ROS值均低于高糖培養(yǎng)組(P＜0.05)。MMP檢測結果顯示，高糖損傷12h后，細胞MMP較正常對照組顯著下降(P＜0.05)，Lc處理后，MMP均高于高糖培養(yǎng)組(P＜0.05)。
　　 結論:改進的酶消化法是一種簡便有效的純化培養(yǎng)視網(wǎng)膜Müller細胞的方法;高糖條件下視網(wǎng)