左卡尼汀對體外高糖培養(yǎng)鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞的保護作用及機制探討.pdf

1、目的:探討左卡尼汀(L-carnitine，LC)對高糖損傷鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞的保護作用及可能的機制。
　　 方法:選擇出生1～3d的SD大鼠，取視網(wǎng)膜，0.125％的胰蛋白酶消化制備單細胞懸液后進行體外培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡觀察細胞生長形態(tài)，采用Thy1.1單克隆抗體和微管相差蛋白-2多克隆抗體(Map2)對培養(yǎng)4d的細胞進行鑒定。臺盼藍拒染實驗觀察不同濃度葡萄糖作用下視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞生長狀況，并計算細胞存活率。待細胞達80％融合時

2、進行實驗分組如下:正常細胞培養(yǎng)組（對照組）、單純LC組、高糖損傷組、LC保護組、N-乙酰半胱氨酸(NAC)，MTT法檢測各組細胞活力;流式細胞儀測各組細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平;Hoechst33342染色觀察各組細胞凋亡率;JC-1染色后采用流式細胞儀檢測各組細胞線粒體膜電位的變化。
　　 結(jié)果:體外培養(yǎng)細胞免疫熒光雙標鑒定顯示大部分為Thy1.1及Map2陽性。通過臺盼藍拒染實驗比較不同濃度葡萄糖及不同干預(yù)時間視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞

3、存活率，最終選擇30mmol/L葡萄糖干預(yù)48h建立高糖損傷模型。MTT結(jié)果顯示高糖損傷組細胞活性顯著下降（P＜0.01），左卡尼汀保護組細胞活力較高糖組顯著提高（P＜0.01）。高糖損傷組ROS水平高于正常細胞組，差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），LC保護組ROS水平顯著低于高糖損傷組(P＜0.01)。高糖損傷組Hoechst33342染色可見大量細胞出現(xiàn)凋亡的形態(tài)學改變（如細胞核致密濃染、核固縮、邊緣化等），細胞凋亡率顯著高于正常組