大鼠急性心功能障礙模型心肌組織B型鈉尿肽(BNP)的表達(dá)規(guī)律及法醫(yī)學(xué)分析.pdf

1、前言
　　 心源性猝死是全世界最常見(jiàn)的死因之一,心源性猝死的鑒定也是法醫(yī)病理學(xué)最主要的任務(wù)之一。傳統(tǒng)的法醫(yī)病理學(xué)對(duì)心肌損傷的認(rèn)定主要集中在形態(tài)學(xué)指標(biāo)的檢測(cè),客觀評(píng)價(jià)心功能障礙的指標(biāo)尚未引起足夠的重視。然而,一些心源性猝死的案件中引起猝死的形態(tài)學(xué)病變往往不特異或者很輕微,例如心肌病、心律失常以及一些沒(méi)有明顯的缺血性損傷的缺血性心肌病,死亡原因主要為急性心功能障礙或者慢性心功能障礙急性加劇,因此,從法醫(yī)病理學(xué)的觀點(diǎn)來(lái)看,客觀評(píng)價(jià)死亡

2、之前的心功能狀態(tài)能更好地闡明猝死的確切機(jī)制,尤其在缺乏典型形態(tài)學(xué)損傷的心源性猝死的案件中具有重要的法醫(yī)學(xué)意義。
　　 盡管研究表明檢測(cè)心包液中BNP的濃度有助于推測(cè)死前心功能狀態(tài),但相關(guān)研究也表明,心包液中BNP濃度的升高主要出現(xiàn)在慢性充血性心衰以及部分心肌梗死的案例中,而在一些由急性缺血性心臟病發(fā)作引起的猝死的案件中,心包液中BNP通常比較低。由于BNP首先在心肌組織中合成而后才到達(dá)心血和心包液,因此探索急性心功能障礙后心肌組

3、織中BNP合成、釋放及表達(dá)規(guī)律并開(kāi)發(fā)能夠客觀檢測(cè)心功能早期變化的實(shí)驗(yàn)方法很有必要。因此,本實(shí)驗(yàn)以大鼠心肌組織作為研究對(duì)象,研究大鼠急性心功能障礙時(shí)心肌組織中BNP的表達(dá)變化規(guī)律,探討檢測(cè)心肌組織中BNP在急性心功能障礙的法醫(yī)學(xué)診斷中的應(yīng)用價(jià)值。
　　 材料與方法
　　 健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,體重300-350g左右,手術(shù)前飼養(yǎng)一周,每天更換墊料,飼養(yǎng)室保證空氣流通,維持正常的光照時(shí)間和黑暗

4、時(shí)間,大鼠隨機(jī)分成8組,每組5只,7個(gè)實(shí)驗(yàn)組(1h,2h,4h,6h,8h,10h,12h)和1個(gè)空白對(duì)照組。手術(shù)前以40mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后,氣管插管,將心電圖電極固定在大鼠肢體上,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中全程監(jiān)測(cè)心電圖。胸骨右側(cè)2、3肋間切口,分層打開(kāi)胸腔,在主動(dòng)脈根部鈍性游離胸主動(dòng)脈,將內(nèi)徑為0.8mm的針頭平行置于胸主動(dòng)脈上,用4號(hào)手術(shù)絲線將胸主動(dòng)脈和注射器針頭一同結(jié)扎,使胸主動(dòng)脈縮窄約40%-50%左右,然后緩慢將注射器針頭撤

5、出,關(guān)胸,分層縫合,青霉素抗感染,老鼠恢復(fù)自主呼吸后,拔出氣管插管。結(jié)扎后0h,1h,2h,4h,6h,8h,10h,12h對(duì)大鼠的血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定,然后將大鼠斷頸處死,取心血以及左室前壁心肌組織,心肌組織分為三部分,分別作Elisa、免疫組化、Western Blot、real-time RT PCR分析
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 大鼠急性心功能障礙模型建立后1-2小時(shí)大鼠心肌組織中能檢測(cè)到點(diǎn)片狀免疫陽(yáng)性著色,而且陽(yáng)

6、性反應(yīng)的強(qiáng)度和面積隨著心功能障礙持續(xù)時(shí)間的增加而增強(qiáng),4小時(shí)到6小時(shí)表現(xiàn)為強(qiáng)陽(yáng)性,10小時(shí)到12小時(shí)心肌組織呈現(xiàn)彌漫性陽(yáng)性反應(yīng)。Elisa結(jié)果顯示,在開(kāi)始的兩小時(shí)內(nèi),血清中的BNP濃度急速升高,1h和2h血清中的濃度分別為215pg/ml和298pg/ml,10h大鼠血清中BNP達(dá)到峰值,濃度為464pg/ml,12h呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。心肌組織中BNP蛋白和mRNA定量結(jié)果均顯示,心肌組織中BNP含量變化隨心功能障礙程度和持續(xù)時(shí)間增加表現(xiàn)出

7、一定的時(shí)間規(guī)律性。BNP mRNA較BNP蛋白變化時(shí)間提前,而且與對(duì)照組之間的差異更明顯。急性心功能障礙后1h,大鼠心肌組織中BNP mRNA含量即達(dá)到對(duì)照組的3.2倍,BNP mRNA含量在6h達(dá)到峰值,6h到12h BNP mRNA含量呈下降趨勢(shì)。
　　 結(jié)論
　　 檢測(cè)心肌組織中BNP的表達(dá)是判斷心功能狀態(tài)的一種有效手段,BNP mRNA是反應(yīng)急性心功能障礙更敏感的指標(biāo)。從法醫(yī)病理學(xué)的觀點(diǎn)來(lái)看,檢測(cè)心肌組織中BNP