混合DNA分型結(jié)果的解釋及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用.pdf

1、目的：通過制備不同混合比例的模擬混合DNA，利用混合DNA分型中的峰高或峰面積信息，采用一定的參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)建立在峰高或峰面積基礎(chǔ)上各基因座的表型組合進(jìn)行分析，篩選出合理的表型組合，建立限制性組合分析法對(duì)混合DNA分型的結(jié)果進(jìn)行解釋，從而對(duì)男/女兩人混合DNA分型的組分來源進(jìn)行認(rèn)定。并通過實(shí)際案例的驗(yàn)證，對(duì)建立的分析法在法醫(yī)學(xué)應(yīng)用中的適用范圍進(jìn)行探索，為解決法醫(yī)學(xué)應(yīng)用中男/女兩人混合DNA分型結(jié)果的解釋提供科學(xué)合理的途徑。 方法：選

2、擇AB-YfilerTM試劑盒中007陽性對(duì)照品作為已知男性DNA，選擇AB-IdentifilerTM試劑盒中9947A陽性對(duì)照品作為已知女性DNA(兩者濃度均為0.1ng/μl)。制備8個(gè)梯度比例的25例常量和不同混合比例不同混合DNA總模板量的19例低拷貝男/女兩入模擬混合DNA(每個(gè)梯度比例同時(shí)做三次平行試驗(yàn))，應(yīng)用雜合型均衡比和混合比兩個(gè)參數(shù)，通過性別基因座估計(jì)男/女兩人混合DNA中男性DNA所占的比例，對(duì)在峰高(峰面積)信息

3、基礎(chǔ)上各基因座的表型組合進(jìn)行限制性的分析，篩選出合理的表型組合，建立限制性組合分析法。對(duì)男性組分混合比為95％、50％、5％的9個(gè)模擬混合樣本的峰高和峰面積信息分別進(jìn)行分析，比較其在限制性組合分析法中的應(yīng)用有無差別。通過12例常量和5例低拷貝男/女兩人混合DNA案件對(duì)建立的分析法進(jìn)行驗(yàn)證，觀察分析結(jié)果。 對(duì)混合DNA分型中出現(xiàn)的一個(gè)等位基因缺失、兩個(gè)等位基因缺失及低拷貝DNA分型中等位基因缺失三種類型，參考PeterGill推薦

4、的相應(yīng)的量化公式[2]進(jìn)行似然率(LR)計(jì)算。 結(jié)果：25例模擬常量混合DNA分析的結(jié)果顯示：3例混合樣本檢出的基因座數(shù)為15個(gè)(檢出率100％)，5例檢出數(shù)為14個(gè)(檢出率93％)，4例檢出數(shù)為13個(gè)(檢出率87％)，6例檢出數(shù)為12個(gè)(檢出率80％)，3例檢出數(shù)為11個(gè)(檢出率73％)，最低檢出數(shù)為8個(gè)(檢出率53％)僅1例；在男性組分混合比為95％的三次重復(fù)混合樣本中，分離得到的男性DNA分型依次出現(xiàn)2個(gè)、1個(gè)和4個(gè)等位基

5、因缺失，其余混合樣本均無缺失；6例混合樣本出現(xiàn)等位基因的錯(cuò)判，其中5例樣本錯(cuò)判數(shù)1個(gè)基因座、1例錯(cuò)判2個(gè)基因座，6例中的3例均為男性組分混合比為30％的樣本；25例混合樣本的似然率(LR)值均達(dá)到14個(gè)數(shù)量級(jí)以上。 19例模擬低拷貝混合DNA分析的結(jié)果顯示：1例低拷貝混合樣本的檢出基因座數(shù)為12個(gè)(檢出率80％)，1例檢出數(shù)為11個(gè)(檢出率73％)，最低檢出基因座數(shù)為3個(gè)(檢出率20％)共4例；6例樣本出現(xiàn)等位基因缺失，缺失集中

6、在男性混合比低于20％或混合DNA模板量為100pg的樣本中；18例樣本出現(xiàn)等位基因錯(cuò)判；同一混合比的三次重復(fù)樣本間LR值差別多數(shù)在6個(gè)數(shù)量級(jí)以內(nèi)。 選擇峰高與峰面積信息進(jìn)行混合DNA的分析在檢出基因座數(shù)、等位基因缺失數(shù)和錯(cuò)判基因座數(shù)三方面無明顯差別。 17例混合DNA案件驗(yàn)證的結(jié)果顯示：12例常量混合DNA案件中，4例案件檢出基因座數(shù)為15個(gè)，2例檢出數(shù)為14個(gè)，1例檢出數(shù)為13個(gè)，2例檢出數(shù)為12個(gè)，2例檢出數(shù)為11

7、個(gè)，最低檢出數(shù)為10個(gè)僅1例；5例案件出現(xiàn)等位基因缺失，其中4例均缺失1個(gè)基因座、1例缺失3個(gè)基因座；12例案件均無等位基因錯(cuò)判。5例低拷貝混合DNA案件中，最高檢出基因座數(shù)為9個(gè)，最低檢出數(shù)僅為3個(gè)；僅1例出現(xiàn)缺失現(xiàn)象；錯(cuò)判基因座數(shù)共10個(gè)。 結(jié)論：結(jié)合44例模擬混合DNA和17例混合DNA案件的分析，建立的限制性組合分析法的適用范圍是：混合DNA分型的15個(gè)基因座中最高等位基因條帶的相對(duì)熒光強(qiáng)度應(yīng)大于1000rfu，且混合比