應(yīng)用PCR-SSCP銀染檢測腦膠質(zhì)瘤中LGI1基因突變.pdf

1、研究背景Chernova等人于1998年從膠質(zhì)母細胞瘤細胞系T98G染色體10q24區(qū)域分離出一個新的基因，該基因在多型膠質(zhì)母細胞瘤中雜合性缺失(LOH)高達80％以上，它編碼一種富含亮氨酸重復(fù)序列(LRRs)的蛋白質(zhì)。初步研究提示，該基因在神經(jīng)組織中能高度特異性的表達，在低級別膠質(zhì)瘤中表達降低，在惡性膠質(zhì)瘤細胞中表達明顯降低，甚至消失，具有腫瘤抑制基因的特性，故將其命名為富亮氨酸膠質(zhì)瘤失活基因1(Leucinerichgene-Gli

2、omaInactivated1，LGI1)。該基因是繼PTEN后新近才發(fā)現(xiàn)的候選的抑癌基因，關(guān)于該基因的研究尚未成為熱點，目前多數(shù)研究與顳葉癲癇的發(fā)病有關(guān)，與腦腫瘤有關(guān)的研究相對較少，該基因的生物學(xué)作用機制尚不明確。國內(nèi)未見該基因的研究報告。 目的為了檢測人腦膠質(zhì)瘤組織及膠質(zhì)瘤細胞系LGI1基因編碼區(qū)中有無堿基突變，并探討LGI1基因突變在膠質(zhì)瘤發(fā)生、進展過程所起的作用。 材料與方法收集12例天津市環(huán)湖醫(yī)院、天津市第一中

3、心醫(yī)院手術(shù)切除的新鮮膠質(zhì)瘤標本，1例正常腦組織標本；體外培養(yǎng)TJ905、SK-N-SH、A172、U251、H45種腦膠質(zhì)瘤細胞系。提取組織標本及培養(yǎng)細胞基因組DNA。設(shè)計特異性引物分別擴增LGI1各外顯予序列，采用SSCP銀染分析，發(fā)現(xiàn)異常泳動條帶進行DNA序列分析。 結(jié)果1、瓊脂糖凝膠電泳檢測證實在膠質(zhì)瘤組織標本、細胞系及正常腦組織均克隆出完整的與預(yù)期片段一致的LGI1外顯子序列。 2、瓊脂糖凝膠電泳未檢測到膠質(zhì)瘤細

4、胞系SK-N-SH第1外顯子處擴增產(chǎn)物，推測其在此處發(fā)生了基因缺失。 3、未在12例膠質(zhì)瘤標本中檢測到SSCP銀染異常條帶。 4、在細胞系TJ905第5外顯子處檢測到電泳條帶異常，經(jīng)DNA測序分析證實確有突變，突變位點位于第5外顯子的第7(TCT→TCC)、第9(GAC→AAC)、第10(CTC→CCC)、第13(GAT→AAT)以及第18(CTG→CGG)密碼子。 結(jié)論未在腦膠質(zhì)瘤標本中發(fā)現(xiàn)LGI1基因編碼區(qū)突