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文檔簡介
1、目的:對Ro 60在胃癌多藥耐藥中的功能進行研究,并探討其作用機制.方法:①應(yīng)用RT-PCR技術(shù)從SGC7901/VCR細胞中克隆Ro 60編碼基因的cDNA.②應(yīng)用半定量RT-PCR技術(shù)檢測Ro 60在胃癌細胞中的表達情況.③利用DNA重組技術(shù)構(gòu)建Ro 60編碼cDNA的正、反義表達載體,在脂質(zhì)體的介導(dǎo)下分別將其轉(zhuǎn)導(dǎo)入SGC7901細胞及SGC7901/VCR細胞,應(yīng)用半定量RT-PCR技術(shù)檢測Ro 60在正、反義轉(zhuǎn)染細胞及其對照細胞
2、中的表達情況.④通過MTT法繪制細胞生長曲線及進行體外藥物敏感性分析,計算胃癌細胞對化療藥物的IC<,50>值.⑤借助流式細胞儀檢測胃癌細胞內(nèi)蓄積和潴留的阿霉素.⑥應(yīng)用藥物阻斷實驗和Western blot,對Ro 60在胃癌多藥耐藥中的作用機制進行研究. 結(jié)論:①在SGC7901/VCR細胞中發(fā)現(xiàn)Ro 60編碼基因的兩種轉(zhuǎn)錄變異體,并登錄到GenBank,Accession number分別為AY205314、AY205315,Ro
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