生物堿類胃癌多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的篩選及機(jī)制研究.pdf

1、目的：多藥耐藥性（MDR）是導(dǎo)致腫瘤化療失敗的主要原因之一，從中藥單體、復(fù)方中篩選高效、低毒的腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑是目前抗腫瘤藥物研究的新策略。本研究以人胃癌親本細(xì)胞系SGC7901和耐藥細(xì)胞系SGC7901/VCR為細(xì)胞模型，駱駝蓬堿（HM）、去氫駱駝蓬堿（HMI）、貝母素甲（PM）、貝母素乙（PMI）和氧化苦參堿（OMT）等5種生物堿類藥物為研究對(duì)象，體外篩選MDR逆轉(zhuǎn)劑，研究其耐藥逆轉(zhuǎn)活性及作用機(jī)制，為臨床治療多藥耐藥性胃癌提供逆轉(zhuǎn)策略

2、。
　　方法：
　?。?）MTT法檢測(cè)HM、HMI、PM、PMI和OMT的細(xì)胞毒性及耐藥逆轉(zhuǎn)效果；
　?。?）流式細(xì)胞儀檢測(cè)篩選出的貝母素乙對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)阿霉素（ADR）蓄積的影響；
　?。?）Western blot法檢測(cè)貝母素乙干預(yù)后P-糖蛋白（P-gp）的表達(dá)變化；
　?。?）流式細(xì)胞儀檢測(cè)貝母素乙誘導(dǎo)SGC7901/VCR細(xì)胞凋亡的百分率變化；
　?。?） Western blot法檢測(cè)貝母素乙

3、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時(shí) Bcl-2、Bax、Caspase-3和Cleaved caspase-3蛋白的表達(dá)差異；
　　（6）細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)貝母素乙誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞凋亡的過(guò)程中Cleaved caspase-3蛋白表達(dá)差異。
　　結(jié)果：
　　（1）HM、HMI、PM、PMI和OMT均能不同程度的抑制親本細(xì)胞SGC7901和耐藥細(xì)胞SGC7901/VCR的增殖作用，非毒性劑量的貝母素乙能夠顯著提高 SGC7901/VCR細(xì)胞對(duì)化

4、療藥物長(zhǎng)春新堿（VCR）、阿霉素、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、順鉑（CDDP）敏感性。
　　（2）非毒性劑量的貝母素乙能夠顯著提高 SGC7901/VCR細(xì)胞內(nèi) ADR的蓄積，降低P-gp的表達(dá)。
　?。?）貝母素乙聯(lián)合5-Fu可誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞凋亡：
　?、倭魇郊?xì)胞儀結(jié)果顯示：對(duì)照組單獨(dú)使用貝母素乙或5-Fu時(shí)，細(xì)胞凋亡百分率小于15％，實(shí)驗(yàn)組聯(lián)合用藥時(shí)，細(xì)胞凋亡百分率分別為：17.8%、29.5%、44.5%；
　

5、　②Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而Caspase-3和Cleaved caspase-3蛋白表達(dá)呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性增加。
　?、奂?xì)胞免疫熒光法檢測(cè)證明了貝母素乙聯(lián)合5-Fu可誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞凋亡，其凋亡機(jī)制與激活Caspase-3產(chǎn)生Cleaved caspase-3剪切體的相關(guān)。
　　結(jié)論：貝母素乙能夠作為胃癌多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑逆轉(zhuǎn)MDR，其逆轉(zhuǎn)機(jī)制與下