低溫機械灌注在邊緣供腎保存中的優(yōu)勢及其機制的研究.pdf

1、目的:
　　建立家兔腎臟在體機械灌注與冷保存模型;低溫機械灌注對比傳統(tǒng)冷保存在邊緣供腎保存中的優(yōu)勢并探討其機理。
　　試驗分為兩部分
　　第一部分:建立家兔DCD(DonationAfterCardiacDeath, DCD)腎臟在體機械灌注與冷保存模型。
　　方法:健康成年家兔10只,雌雄不限,體重(3.0±0.3)Kg,隨機分為低溫機械灌注組(MP組)與靜態(tài)冷保存組(CS組),每組5只。MP、CS組均開腹,游

2、離腎動、靜脈,夾閉腎動、靜脈35分鐘,開放血流60分鐘后腎動脈穿刺置管行冷灌洗并將腎臟移至體外, MP組灌洗后接 Lifeport(美國 Organ Recovery Systems公司),選擇20mmHg灌注壓,4小時低溫機械灌注;CS組灌洗后將腎臟放入器官保存液中并低溫保存4小時;每半小時測量一次兩組保存液的溫度。4小時后移除MP、CS組動靜脈所置導管并縫合血管,開放血流,左腎復灌、復溫,切除右腎,膀胱造瘺留置尿管。術前、術中2小時

3、(B2)、術畢(B3)檢測三次血氣并據此調整水、電解質與酸堿平衡。夾閉腎動、靜脈期間每5分鐘記錄一次體溫。MP組器械灌注期間每小時記錄一次灌注流量。術后記錄24小時尿量與生存率。
　　第二部分:機械灌注與冷保存對免腎保存效果比較研究
　　方法:健康成年家兔15只,雌雄不限,體重(3.0±0.3)Kg,隨機分為假手術組(SO組)、低溫機械灌注組(MP組)及冷保存組(CS組),每組5只。SO組開腹游離腎動、靜脈; MP組復制機械

4、灌注模型,CS組復制冷保存模型。24小時后摘取腎臟標本,心臟取血液標本。檢測血清指標:肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)(自動生化儀檢測)、L-6(酶聯(lián)免疫吸附測定法)。腎臟組織檢測指標:ICAM-1 mRNA轉錄水平(實時熒光定量PCR)。NF-κB p65蛋白的表達情況(免疫組織化學),腎組織病理學改變(HE染色,光鏡觀察)。
　　結果:
　　第一部分:1、體溫:腎動、靜脈夾閉期間各組家兔體溫較為恒定,組間、組內無明顯差異

5、(P>0.05)。
　　2、灌注流量:60min及此后的時間點流量顯著高于0點,具有統(tǒng)計學意義(P<0.001);其他各時間點灌注流量也高于0點,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　3、24小時生存率:MP、CS組24小時生存率均為100％,無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　第二部分:1、尿量:SO組、MP術后24小時尿量顯著高于CS組(P<0.05);MP組顯著高于SO組;
　　2、血清CRE、BUN:N、

6、MP組CRE、BUN顯著低于CS組(P<0.05=;MP組中CRE、BUN水平顯著高于SO組(P<0.05=;3組組內無顯著差異(P>0.05)。
　　3、血清IL-6水平: IL-6表達CS組高于MP組與SO組,存在統(tǒng)計學差異(P<0.05);MP組顯著高于SO組(P<0.05);3組組內無顯著差異(P>0.05)。
　　4、腎臟組織NF-κB p65蛋白表達免疫組化法檢測,采用Image-Pro Plus6.0圖像定量分

7、析軟件,測量平均光密度值并對結果進行定量分析。腎臟組織NF-κB p65蛋白表達CS組高于SO組、MP組,(P<0.05);差異有顯著性意義。SO組與MP組之間無顯著差異(P>0.05)。
　　5、ICAM-1mRNA:RTFQ-PCR檢測,ICAM-1 mRNA:轉錄水平CS組高于MP組與SO組(P<0.05),MP組高于SO組(P<0.05),均有顯著性意義。
　　6、腎臟組織學檢查:HE染色光鏡觀測,SO組腎臟組織結構

8、正常。MP組中腎小管上皮細胞輕度水腫,腎小管管徑增大,尤其近曲小管為甚。CS組中腎小管上皮細胞輕度水腫,近曲小管與遠曲小管的管徑均變小。雖然MP、CS組腎小管上皮細胞均為輕度水腫但是CS組對比MP組則更為嚴重。
　　結論:
　　1、本實驗建立的家兔腎臟在體機械灌注與冷保存模型穩(wěn)定成功率高,實驗條件易于控制,制作方法簡單巧妙,適合家免在體腎灌注與冷保存系列研究。
　　2、低溫機械灌注可降低移植術后血清中CRE、BUN、I