外源性膽紅素在大鼠腎缺血再灌注中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：本研究通過(guò)復(fù)制大鼠腎缺血再灌注模型，探索外源性膽紅素在大鼠腎缺血再灌注過(guò)程中是否具有抗氧化損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制，并探討該作用與膽紅素劑量之間是否存在劑量依賴關(guān)系。 方法：60只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為10小組，(1)假手術(shù)組(n=12)，按縫合切口后12小時(shí)、24小時(shí)兩個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)分為兩小組，即假手術(shù)后12小時(shí)組、24小時(shí)組，每組6只；(2)缺血再灌注模型組(模型組)(n=12)，按再灌注后12小時(shí)、24小時(shí)

2、兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)分為兩小組，即缺血再灌后12小時(shí)、24小時(shí)組，每組6只；(3)膽紅素處理組(BR組)(n=36)，按不同劑量組及處理時(shí)間的不同細(xì)分為2.5μmolBR再灌注后12小時(shí)組、24小時(shí)組，5μmolBR再灌注后12小時(shí)組、24小時(shí)組，10μmolBR再灌注后12小時(shí)、24小時(shí)組，共六小組，每組6只。各組動(dòng)物按35～40mg/kg的劑量從腹腔注射3％的戊巴比妥鈉麻醉后開腹，假手術(shù)組切除右腎，只模擬模型組分離左腎動(dòng)脈但不夾閉，45分鐘后

3、縫合切口；模型組和膽紅素處理組均切除右腎，分離左腎動(dòng)脈并夾閉，45分鐘后松開動(dòng)脈夾行再灌注并縫合切口。假手術(shù)組和模型組在再灌前從腎靜脈注射與膽紅素處理組相同容量(1ml)的溶劑，膽紅素處理組在再灌前即刻從腎靜脈注射相同容量(1ml)不同劑量的膽紅素溶液。各組按相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)在再灌后12小時(shí)或24小時(shí)從下腔靜脈取血2.5ml，測(cè)血尿素氮(BUN)和血肌酐(Cr)，同時(shí)取左腎組織0.5g迅速冷凍在低溫冰箱中，做成勻漿后測(cè)定超氧化物歧化酶(sup

4、eroxidedismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量和總抗氧化能力(totalanti-oxidationcapacity，T-AOC)。取12小時(shí)、24小時(shí)兩個(gè)時(shí)間組的腎組織用10％的甲醛固定，制備石蠟切片，HE染色后觀察腎組織形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果：1、腎功能改變與假手術(shù)組即正常對(duì)照組相比：缺血再灌注12h模型組、24h模型組BUN和Cr含量均顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05

5、)。與模型組比較：2.5BR、5BR處理12h、24h組BUN和Cr含量均顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；但10BR處理24h組Cr含量顯著高于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。不同劑量BR處理相同時(shí)間組之間比較：2.5BR、5BR及10BR處理12h、24h組的BUN和Cr含量均有顯著差異，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與相同處理時(shí)間組相比，5BR處理12h、24h組的BUN和Cr含量含量均最低。不同時(shí)間

6、組之間(即24h組與12h組之間)比較：缺血再灌注24h模型組的BUN和Cr含量均較缺血再灌注12h模型組顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；10BR處理24h組的BUN和Cr含量均較12h組顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 2、腎組織各項(xiàng)生化檢測(cè)指標(biāo)改變2.1T-AOC檢測(cè)結(jié)果：與假手術(shù)組即正常對(duì)照組相比：缺血再灌注12h與24h模型組、2.5BR與10BR處理12h、24h組的T-AOC活力均顯著降低

7、，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；5BR處理12h、24h組T-AOC活力均顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與模型組比較：2.5BR、5BR處理12h、24h組T-AOC活力均顯著增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；但10BR處理12h組T-AOC活力顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。不同劑量BR處理組之間比較：2.5BR、5BR及10BR處理12h、24h組T-AOC活力均有顯著差異，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

8、意義(P＜0.05)；其中與相同處理時(shí)間組相比，5BR處理12h、24h組的T-AOC活力均最高。不同時(shí)間組之間(即24h組與12h組之間)比較：缺血再灌注24h模型組的T-AOC活力較12h組顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；5BR處理24h組T-AOC活力較12h組顯著增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。2.2SOD活力比較：與假手術(shù)組即正常對(duì)照組相比：缺血再灌注12h、24h模型組SOD活力均顯著降低，差異具有統(tǒng)

9、計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；2.5BR與10BR處理12h、24h組的SOD活力均低于假手術(shù)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；但5BR處理12h、24h組SOD活力與假手術(shù)相同時(shí)間組相比，差異無(wú)顯著性，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與模型組比較：2.5BR、5BR處理12h、24h組SOD活力均顯著增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；但10BR處理12h、24h組SOD活力與模型組相同時(shí)間組比較，差異無(wú)顯著性，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

10、意義(P＞0.05)。不同劑量BR處理組之間比較：2.5BR、5BR及10BR處理12h、24h組SOD活力均有顯著差異，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；其中與相同處理時(shí)間組相比，5BR處理12h、24h組SOD活力均最高。不同時(shí)間組之間(即24h組與12h組之間)比較：缺血再灌注24h模型組及10BR處理24h組的SOD活力較12h組顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。2.3MDA含量比較與假手術(shù)組即正常對(duì)照組相比：缺血

11、再灌注12h、24h模型組及10BR處理12h、24h組的MDA含量均顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與模型組比較：2.5BR、5BR處理12h、24h組MDA含量均顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；10BR處理24h組與缺血再灌注24h模型組比較MDA含量升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。不同劑量BR處理組之間比較：2.5BR、5BR及10BR處理12h、24h組MDA含量均有顯著差異，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

12、意義(P＜0.05)；其中與相同處理時(shí)間組相比，5BR處理12h、24h組MDA含量均最低。不同時(shí)間組之間(即24h組與12h組之間)比較：缺血再灌注24h模型組的MDA含量較缺血再灌注12h模型組升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；10BR處理24h組MDA含量較12h組升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 3、腎組織學(xué)變化比較：模型組與假手術(shù)組比較，缺血再灌注后12h組腎小球結(jié)構(gòu)改變不明顯，24h組球囊間隙增寬；

13、腎小管損傷改變較重，小管上皮變性脫落，管腔擴(kuò)張，腔內(nèi)可見管型；腎間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯。與模型組比較，2.5BR和5BR處理12h和24h組腎組織損傷均減輕。 結(jié)論：1、外源性膽紅素可能通過(guò)增強(qiáng)組織T-AOC和SOD活性提高大鼠腎組織的抗氧化應(yīng)激的能力，清除大鼠腎組織內(nèi)大量生成的活性氧自由基，減輕腎組織的炎性損傷，從而減輕大鼠腎IRI，保護(hù)腎功能； 2、膽紅素的作用與其劑量有關(guān)，一定劑量的膽紅素可以減輕大鼠腎IRI，保護(hù)腎