MicroRNA-21對(duì)腎缺血再灌注損傷的調(diào)控作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　探索 microRNA-21在腎缺血再灌注損傷中作用機(jī)制,以期找到防治腎缺血再灌注損傷 microRNA分子靶標(biāo)。
　　方法:
　　采用微型血管夾,同時(shí)夾閉雄性 BALB/C小鼠雙側(cè)腎蒂構(gòu)建實(shí)驗(yàn)所需的腎缺血再灌注損傷模型,參照前期實(shí)驗(yàn)的結(jié)果和本次試驗(yàn)的目的將小鼠分為Pre-miR-21+IRI組(阻斷腎蒂血管45分鐘,再灌注24h,于術(shù)前24小時(shí)和6小時(shí)分別按200 ng/kg腹腔注射 mir-21agom

2、ir)、PBS+IRI組(阻斷腎蒂血管45分鐘,再灌注24h于術(shù)前24小時(shí)和6小時(shí)分別腹腔注射等體積的 PBS)、Pre-miR-21+shame組(僅打開腹腔不阻斷腎蒂血管,于術(shù)前24小時(shí)和6小時(shí)分別按200 ng/kg腹腔注射 mir-21agomir)、PBS+shame組(僅打開腹腔不阻斷腎蒂血管,于術(shù)前24小時(shí)和6小時(shí)分別腹腔注射等體積 PBS),(n≥5)。四組小鼠缺血再灌注損傷后,收集小鼠血液檢測(cè)血清肌酐、尿素氮判斷腎功能

3、。斷頸法處死小鼠,從小鼠背部取一手術(shù)切口獲取雙側(cè)模型腎臟。一側(cè)腎臟行 HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察模型腎病理組織變化,另一側(cè)腎臟檢測(cè)模型腎中microRNA-21,PDCD4、PTEN基因的 mRNA和 caspase-3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)Pre-miR-21+IRI、PBS+IRI組、Pre-miR-21+shame組和 PBS+shame組組小鼠存活率分別為87％、75%、100%、100%。Pre-mi

4、R-21+IRI組中血清肌酐、尿素氮和腎組織病理評(píng)分明顯低于 PBS+IRI組,但上述兩組均高于 PBS+shame組和 Pre-miR-21+shame(P<0.05);PBS+shame組與 Pre-miR-21+shame組腎組織病理評(píng)分和血清肌酐、尿素氮無明顯差異(P>0.05)。
　　(2)四組小鼠中 miR-21的表達(dá)存在顯著差異,從高到低的排列順序?yàn)镻re-miR-21+IRI、Pre-miR-21+shame組、P

5、BS+IRI組、PBS+shame組(P<0.05);Pre-miR-21+IRI組中靶基因 PDCD4、PTEN的 mRNA表達(dá)量低于 PBS+IRI組(P<0.05);PBS+IRI組中靶基因 PDCD4、PTEN的 mRNA表達(dá)量低于 PBS+shame組(P<0.05);PBS+shame組與 Pre-miR-21+shame組兩組之間靶基因 PDCD4、PTEN的 mRNA表達(dá)量無明顯差異(P>0.05)。
　　(3)、

6、Pre-miR-21+IRI組中 cleaved caspase-3表達(dá)明顯低于 PBS+IRI組(P<0.05),PBS+IRI組中 cleaved caspase-3高于 PBS+shame組和 Pre-miR-21+shame組(P<0.05),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組中未經(jīng)激活的 pro-caspase-3無明顯差異,P>0.05無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　(1)成功構(gòu)建了雄性 BALB/c小鼠腎臟中 mir-2