2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景:急性腎衰竭(acute renal failure,ARF)是一種常見的臨床危急重癥,常以氮質(zhì)血癥、水電解質(zhì)和酸堿平衡紊亂及全身各系統(tǒng)并發(fā)癥為主要臨床表現(xiàn),嚴(yán)重危害人類健康。近年來,盡管ARF的基礎(chǔ)和臨床研究取得了較大進(jìn)展,但其發(fā)病率和死亡率仍居高不下,其主要原因是ARF發(fā)病原因錯(cuò)綜復(fù)雜,發(fā)病機(jī)制迄今尚未明確,特別是很多ARF患者早期癥狀不明顯,直致病情發(fā)展到一定程度才出現(xiàn)血清肌酐升高,讓臨床醫(yī)生失去了適時(shí)救治的良好機(jī)會(huì)。因此

2、,近年來學(xué)者們將急性腎損傷(acute kidney injury,AKI)的概念引入腎臟病和急診醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,趨向?qū)RF更稱為急性腎損傷,這樣更有利于臨床醫(yī)生早期診斷和治療AKI,即在腎功能開始下降、甚至腎臟組織學(xué)有損傷、生物標(biāo)志物改變而GFR尚正常的階段將之識(shí)別并及早干預(yù)治療,以避免ARF的發(fā)生。如何早期識(shí)別和診斷AKI,何種機(jī)制和學(xué)說能更好的解釋AKI的發(fā)生發(fā)展過程已成為當(dāng)今腎臟病領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。
   腎缺血-再灌注損傷(

3、Ischemia reperfusion injury,IRI)是AKI的主要發(fā)病機(jī)制之一,這已被學(xué)者們的研究證實(shí)。而凋亡和炎癥在腎IRI的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。IRI可引起腎小球內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙,繼而內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞間粘附分子增多,介導(dǎo)血流中的有形成分如中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞粘附至血管內(nèi)皮細(xì)胞,這些細(xì)胞都可以通過各種網(wǎng)絡(luò)信息調(diào)控并刺激這些細(xì)胞分泌TNF-α、IL-2、IL-6、IL-8等炎癥因子和MCP-1等化學(xué)趨化因子,通過這些炎性因

4、子再激活炎癥的級(jí)聯(lián)反應(yīng),導(dǎo)致腎組織炎癥反應(yīng)發(fā)生,最終引起AKI。腎小管上皮細(xì)胞,作為腎臟的固有細(xì)胞,在腎IRI的環(huán)境下,其本身既可以因?yàn)槿毖艿綋p傷,也可以在某些因子的影響下轉(zhuǎn)化為炎癥細(xì)胞,分泌TNF-α、IL-2、IL-6等炎癥因子,參與了AKI的發(fā)生。實(shí)驗(yàn)研究表明,TNF-α、IL-1、IL-6等炎癥因子的拮抗劑通過抑制IRI相關(guān)的炎癥和腎小管上皮細(xì)胞凋亡發(fā)揮腎保護(hù)作用,提示TNF-α、IL-1、IL-6等炎癥因子在AKI發(fā)生和治

5、療中起了十分重要的作用。
   本組前期研究已證明冬蟲夏草(Cordyceps Sinensis,CS)對(duì)糖尿病腎病、高血壓腎損傷模型鼠具有良好的腎保護(hù)作用,CS是否可以通過影響腎IRI誘導(dǎo)的炎癥和氧化應(yīng)激發(fā)揮腎保護(hù)作用,其作用靶點(diǎn)是否與抑制Notch信號(hào)通路活化有關(guān),目前國內(nèi)外未見報(bào)道。本研究擬以I/R大鼠模型和抗霉素A與腎小管上皮細(xì)胞共培養(yǎng)模擬的體外的I/R模型為研究對(duì)象,一方面觀察I/R損傷時(shí)IL-6、TNF-α、MCP-

6、1和HIF-1α的表達(dá)狀況和Notch2/hes-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是否被激活;另一方面用Notch信號(hào)通路關(guān)鍵酶()-secretase抑制劑和冬蟲夏草進(jìn)行干預(yù)實(shí)驗(yàn),其目的是:
   1.觀察腎I/R是否可上調(diào)腎小管上皮細(xì)胞IL-6、TNF-α、MCP-1和HIF-1α的表達(dá),從而證實(shí)腎IRI存在炎癥和氧化應(yīng)激過程。
   2.觀察腎I瓜是否可激活Notch2/hes-1信號(hào)通路,活化的Notch2/hes-1信號(hào)通是否參

7、與IL-6、TNF-α、MCP-1和HIF-1α的調(diào)控,證實(shí)Notch2/hes-1信號(hào)通路是否參與腎IRI相關(guān)的炎癥和氧化應(yīng)激過程。
   3.觀察冬蟲夏草是否通過抑制Notch2/hes-1信號(hào)通路的活化,繼而影響IL-6、TNF-α、MCP-1和HIF-1α的表達(dá),通過抗炎和抗氧化發(fā)揮腎保護(hù)作用,從而探討冬蟲夏草的作用機(jī)制和靶點(diǎn)。
   實(shí)驗(yàn)方法:
   1.60只健康雄性SD(Sprasue-Dawley

8、)大鼠用10%水合氯醛溶液(3.5mL/kg)腹腔注射局部浸潤麻醉后,從腹部正中切口,行右腎切除術(shù),穩(wěn)定10min后將大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組(sham組)、缺血-再灌注組(I/R)、DAPT組(DAPT)、冬蟲夏草(CS)組4組,每組組內(nèi)再按再灌注時(shí)間分為24h、48h、72h3個(gè)時(shí)間點(diǎn)。缺血-再灌注組(I/R組)大鼠持續(xù)夾閉左腎蒂60min后恢復(fù)灌注,予以生理鹽水(2 mL/d)灌胃;DAPT組大鼠持續(xù)夾閉左腎蒂60min后恢復(fù)灌注,術(shù)

9、后予以γ-泌肽酶抑制劑DAPT(500μg/100g.d)灌胃;冬蟲夏草(CS)組大鼠持續(xù)夾閉左腎蒂60min后恢復(fù)灌注后,予以冬蟲夏草提取液(5g/kg.d)灌胃;假手術(shù)組(sham組)大鼠切除右腎后分離左輸尿管,但不夾閉左腎蒂,術(shù)后予以生理鹽水(2 mL/d)灌胃,分別在上述時(shí)間點(diǎn)處死大鼠,處死前收集尿液和血液。檢測(cè)各組大鼠腎功能(BUN、Scr)情況;ELISA法檢測(cè)各組大鼠TNF-α、IL-6水平;比色法檢測(cè)各組大鼠尿NAG水平

10、,HE染色觀察各組大鼠腎臟病理,并半定量評(píng)分法觀察各組大鼠腎小管間質(zhì)損傷;RT-PCR法檢測(cè)各組大鼠Notch2、hes-1 mRNA的表達(dá);免疫激光共聚焦法和western blot法檢測(cè)各組大鼠Notch2、hes-1、MCP-1、HIF-1α蛋白的表達(dá)。
   2.首先用MTT法觀察不同濃度DAPT(0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L,100μmol/L)和CS提取液(10mg/L,20mg/L,40mg

11、/L,80mg/L)對(duì)NRK52E增殖的影響,確定DAPT工作液和CS工作液的濃度。
   3.將NRK-52E細(xì)胞置于低糖型完全DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng),分為normal組、缺血-再灌注組(I/R組)、DAPT組和CS組4組。I/R誘導(dǎo)的NRK-52E細(xì)胞模型用下法建立:用不含血清的D-Hanks液+抗霉素A(10μmol/L)模擬缺血3h,恢復(fù)低糖型完全DMEM培養(yǎng)基模擬再灌注。normal組NRK-52E不作任何處理,正常條件

12、培養(yǎng):DAPT組NRK-52E造模前24h和再灌注時(shí)用含10μmol/L DAPT工作液處理,直至收集細(xì)胞,組內(nèi)按再灌注時(shí)間分為24h、48h、72h3個(gè)時(shí)間點(diǎn);CS組(n=15):按上述方法造模,造模前24h預(yù)先用含40mg/L的CS工作液處理,再灌注時(shí)用CS工作液培養(yǎng),直至收集細(xì)胞,組內(nèi)按再灌注時(shí)間分為24h、48h、73h3個(gè)時(shí)間點(diǎn)。細(xì)胞免疫化學(xué)熒光法和Western blot法觀察各組NRK-52E細(xì)胞Notch2、hes-1、

13、MCP-1、HIF-1α蛋白的表達(dá)。
   實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
   1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,腎I/R時(shí)大鼠體內(nèi)血清BUN和Scr升高,尿中NAG排出增多,腎臟病理出現(xiàn)腎小管刷狀緣丟失、小管上皮細(xì)胞變性壞死、部分小管擴(kuò)張、管型形成,腎間質(zhì)大量炎癥細(xì)胞浸潤等病變,提示腎I/R大鼠AKI模型建立成功。腎I/R時(shí)大鼠血清TNF-α、IL-6水平增高(P<0.01);腎組織中Notch2、hes-1、MCP-1、HIF-1α的mRNA和/

14、或蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.01),并均于再灌注后24h達(dá)高峰。而DAPT干預(yù)能改善腎小管間質(zhì)損傷,改善腎功能,降低血清TNF-α、IL-6水平(P<0.05或P<0.01),下調(diào)Notch2、hes-1、NF-κB2、MCP-1mRNA和/或蛋白表達(dá),上調(diào)HIF-1α蛋白表達(dá)(P<0.01),提示DAPT可選擇性地阻斷腎小管上皮細(xì)胞Notch2/hes-1信號(hào)通路,調(diào)控IL-6、TNF-α、MCP-1、HIF-1α等轉(zhuǎn)錄,有效地控制腎IR

15、I時(shí)所誘導(dǎo)的炎癥和氧化應(yīng)激過程,具有良好的腎保護(hù)作用。
   2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,CS干預(yù)后可改善I/R大鼠腎小管間質(zhì)損傷,改善其腎功能,同時(shí)降低血清TNF-α、IL-6及尿NAG水平(P<0.01),下調(diào)Notch2/hes-1、MCP-1mRNA和/或蛋白表達(dá)(P<0.01),上調(diào)HIF-1α蛋白表達(dá)(P<0.01),提示CS對(duì)I/R時(shí)的腎保護(hù)作用可能是通過抑制Notch信號(hào)通路活化,調(diào)控IL-6、TNF-α、MCP-1、

16、HIF-1等基因轉(zhuǎn)錄而實(shí)現(xiàn)的。
   3.MTT結(jié)果顯示,與對(duì)照組OD值相比較,濃度為0.1~10μmol/LDAPT組和濃度為10-40mg/L CS NRK52E的OD值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);溶度為100μmol/L的DAPT和80mg/L的CS均能顯著抑制NRK-52E的增值(P<0.01)。因此,我們?cè)谙旅娴膶?shí)驗(yàn)選擇DAPT和CS的處理溶度為10μmol/L和40mg/L。
   結(jié)論:
  

17、 1.腎IRl時(shí)IL-6、TNF-α、MCP-1和HIF-1α表達(dá)上調(diào),證實(shí)腎IRI存在炎癥和氧化應(yīng)激過程。
   2.腎IRI誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞Notch2/hes-1信號(hào)通路活化,活化的Notch2/hes-1信號(hào)通路能調(diào)控IL-6、TNF-α、MCP-1和HIF-1α等的轉(zhuǎn)錄。
   3.冬蟲夏草能減輕腎IRI時(shí)腎臟病理損傷,改善腎功能,有效抑制Notch2/hes-1信號(hào)通路的活化,下調(diào)IL-6、TNF-α、MC

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