益母草和當歸對腎、心缺血-再灌注損傷保護作用及機制的實驗研究.pdf

1、缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury,IRI)是臨床常見的病理過程,為急性器官功能衰竭的重要發(fā)病環(huán)節(jié)。很多臟器可出現(xiàn)缺血/再灌注損傷,尤其是腎臟和心臟。大量實驗揭示,缺血再灌注損傷的發(fā)生機制與氧自由基、鈣超載、白細胞的作用、微血管損傷等多種相關(guān)因素有關(guān),其中自由基和鈣超載是IRI過程中的主要效應(yīng)因子。
　　益母草、當歸為活血化瘀中藥,對多種臟器具有保護作用。但目前尚不清楚這兩種中藥在腎臟、心肌IR

2、I中有無保護作用,以及其作用機理。本研究建立了腎和心肌IRI模型,通過檢測血液腎功能、心功能指標,檢測血液和腎組織中的丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、乳酸(lac

3、tic acid,LA)、三磷酸腺苷酶(adenosinetriphosphatase,ATPase)、鈣離子(Ca2+)等的含量以及結(jié)合病理組織學檢查來探討益母草、當歸對腎臟和心肌IRI的保護作用及作用機理。
　　第一章 益母草對腎缺血再灌注損傷的保護作用及機制研究
　　隨機將30只Wistar大鼠分為假手術(shù)組(簡稱Sham,n=10)、缺血再灌注組(簡稱I/R,n=10)、益母草注射液防治組(簡稱I/R+LHI,n=10

4、)。益母草注射液由四川成都制藥一廠出品,每1mL含鹽酸水蘇堿20mg。
　　尾靜脈置管后,I/R和I/R+LHI大鼠夾閉雙側(cè)腎蒂45min,Sham以相同手術(shù)方法暴露雙測腎臟但不夾閉雙側(cè)腎蒂。再灌注45min后,將動物斷頭處死并取血和左側(cè)腎臟待測。部份左腎切片后行蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin staining,HE)染色,在光學顯微鏡下按Paller氏標準評分;檢測血肌酐(blood creatinine,BC

5、r)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),以及血液和腎組織中MDA、SOD、NO、ROS、ATPase(Ca2+-ATPase、Mg2+-ATPase和Na+-K+-ATPase)和LA的含量。
　　結(jié)果顯示:I/R+LHI中的BCr和BUN均明顯低于I/R(p﹤0.05);I/R+LHI光鏡下病理變化較I/R有明顯改善。Paller氏評分I/R+LHI低于I/R(p﹤0.05);
　　與I/R比較,

6、I/R+LHI血清MDA、NO,腎組織MDA、NO、ROS和LA的含量明顯降低,而I/R+LHI腎組織中的SOD、Ca2+-ATPase、Mg2+-ATPase和Na+-K+-ATPase的活性明顯升高。
　　Sham與I/R比較,上述指標在血清和腎組織中的改變,差異有顯著性(p﹤0.05)。
　　結(jié)果提示:(1)益母草注射液能改善大鼠腎臟IRI后的腎功能;(2)益母草注射液能減輕大鼠IRI后腎小管的損傷程度,減輕腎組織病理

7、形態(tài)學改變;(3)益母草對大鼠腎IRI的保護機制,可能與益母草通過清除氧自由基、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、減輕NO對腎臟的損傷、保護腎臟抗氧化酶和ATPase活性,及減輕腎組織鈣超載有關(guān)。
　　第二章 當歸對家兔急性缺血性腎損傷的保護作用研究
　　用甘油復制兔急性缺血性腎損傷模型,觀察當歸、三七對甘油所致急性缺血性腎損傷的保護作用,并初步探討其機制。40只健康家兔,等分為四組:當歸組、三七組、模型組、正常組。當歸、三七、模型組三組

8、均用50％甘油等滲鹽水15mL/kg.b.w.注入兔雙后肢皮下,復制缺血性腎損傷模型。正常組則于兔雙后肢皮下注射生理鹽水15mL/kg.b.w.。于實驗第24小時取血液、尿液和腎臟,檢測BCr、BUN、尿滲透壓(urine osmotic pressure,UOP)、尿總氨基酸(urinary total amino acid,UTAA)以及腎組織的MDA、SOD、GSH-Px、ATPase、Ca2+。
　　結(jié)果顯示:各組與正常組

9、比,BCr、BUN明顯升高,說明模型復制成功。當歸、三七組無一例死亡,模型組死亡率為30%,BCr、BUN、MDA、UTAA、濾過鈉排泄分數(shù)(fractional excretion of filtered sodium,FENa)和腎組織Ca2+含量均明顯低于模型組(P﹤0.01),而腎組織ATPase、SOD、GSH-Px活性均高于模型組(P﹤0.01)。以上指標,當歸組與三七組比較差異無顯著性(P﹥0.05)。
　　結(jié)果提示

10、:當歸、三七對甘油所致的急性缺血性腎損傷有明顯保護作用,二者效果無差異,其機制可能與二者均有改善微循環(huán)、血液流變學、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、保護腎臟抗氧化酶和ATPase活性,及減輕腎組織鈣超載有關(guān)。
　　第三章 益母草和當歸對家兔心肌IRI的保護作用研究
　　將48只家兔等分為益母草組、當歸組、維拉帕米組和I/R對照組,觀察心電圖ST段、左心室內(nèi)壓(LVSP)及心室內(nèi)壓的上升、下降的最大速率(±dp/dtmax)變化。于缺血前

11、,缺血40min、再灌20min、40min分別取血測定肌酸激酶(CK)活性及MDA含量。結(jié)果顯示,益母草、當歸及維拉帕米對實驗性心肌 IRI的心電圖有明顯改善作用(P<0.05),當歸組動物MDA的升幅低于益母草組(P<0.01),益母草對缺血再灌注動物的LVSP改善作用優(yōu)于當歸(P<0.01),其它二組指標差異無顯著性(P﹥0.05)。結(jié)果表明益母草與當歸對心肌 IRI均有明顯的保護作用,益母草對恢復再灌注心肌收縮力的作用優(yōu)于當歸,