先天性長QT綜合征的基因突變檢測及KCNQ1與KCNE1基因的體外表達研究.pdf

1、第一部分先天性長QT綜合征亞型JLN綜合征的基因突變研究 目的:對一先天性長QT綜合征亞型JLN綜合征家系進行基因突變檢測，以期發(fā)現(xiàn)中國人特有的JLNS突變。 方法:對一個JLNS家系進行全面的家系調(diào)查，收集家系所有成員的外周血，同時收集100例正常人外周血作為對照組，提取基因組DNA，然后采用聚合酶鏈反應及直接測序法對一JLNS家系進行KCNQ1及KCNE1的全基因檢測。 結果:在先證者及其姐姐的KCNQ1基因

2、的第15外顯子發(fā)現(xiàn)一單核苷酸多態(tài)性(SNPs)，2037(G→A)(G643S)，還發(fā)現(xiàn)一個新的突變：KCNQ1基因外顯子2a的第227位核苷酸C被T代替，其編碼的蘇氨酸被異亮氨酸所代替。而這一SNPs及突變分別來自其表型正常的父母親。 結論SNPs及雜合突變可能共同導致JLNS，在中國JLNS家系發(fā)現(xiàn)一SNPs及一個新的突變。 第二部分先天性長QT綜合征亞型RWS綜合征的基因突變研究 目的:對三個先天

3、性長QT間期綜合征(LongQTSyndrome，LQTS)RWS亞型家系的突變進行檢測與分析。 方法:對三個RWS家系進行全面的家系調(diào)查，收集家系所有成員的外周血，同時收集100例正常人外周血作為對照組，提取基因組DNA，然后采用聚合酶鏈反應及直接測序法對其進行KCNQ1全基因檢測以發(fā)現(xiàn)致病突變，測序結果與Genebank中的序列進行對比，比較有無核苷酸的改變。 結果:根據(jù)先證者的臨床表現(xiàn)及心電圖將其致病基因初步定位于

4、KCNQ1基因上，且在KCNQ1基因上發(fā)現(xiàn)—錯義突變940(G→A)(G314S)，此突變在歐美及日本人群中均有發(fā)現(xiàn)，為長QT綜合征的突變熱點.在另兩個RWS家系中未發(fā)現(xiàn)KCNQ1基因突變。 結論:在中國長QT綜合征患者中有與別國患者同樣的突變熱點. 第三部分KCNQ1基因及KCNE1基因的體外表達 目的:將KCNQ1及KCNE1基因進行體外轉(zhuǎn)錄，并利用非洲爪蟾卵母細胞表達系統(tǒng)進行電生理學研究，建立Ik

5、s的體外模型，為進一步研究KCNQ1基因的突變功能建立實驗基礎。 方法:將KCNQ1及KCNE1基因的原核表達載體線性化，然后在體外轉(zhuǎn)錄成cRNA，通過顯微注射注入爪蟾卵母細胞，然后利用雙電極電壓鉗技術記錄膜電流。 結果:KCNQ1無KCNE1時在去極化測試脈沖下顯示為快速激活的外向電流，KCNQ1與KCNE1共表達產(chǎn)生的為緩慢激活的外向電流，符合Iks的特性。KCNQ1產(chǎn)生的外向電流及KCNQ1與KCNE1共表達產(chǎn)生的