耐藥性鮑曼不動桿菌噬菌體特性和基因組及應(yīng)用效果評價.pdf

1、目的:耐藥性鮑曼不動桿菌已成為醫(yī)院主要的病原體，且很容易通過交叉感染在醫(yī)院內(nèi)爆發(fā)流行，威脅患者的生命。尋找有效的預(yù)防及治療的方法是臨床亟待解決的問題。噬菌體被認(rèn)為是針對耐藥菌防治的一種有效手段。本論文對噬菌體消毒和治療的有效性進(jìn)行了初步研究，為防治多耐藥鮑曼不動桿菌感染提供新的思路。
　　方法:本研究根據(jù)鮑曼不動桿菌耐藥嚴(yán)重的現(xiàn)狀，對收集到的40株耐藥性鮑曼不動桿菌進(jìn)行脈沖場凝膠電泳和多位點(diǎn)序列分型;并以這些菌為指示菌分離噬菌體;

2、選取其中一株噬菌體IME-AB2進(jìn)行生物學(xué)特性和全基因組分析;并對該噬菌體在菌液及物體表面的消毒效果進(jìn)行了探究，采用噬菌體吸入治療小鼠多耐藥鮑曼不動桿菌肺部感染，研究其體內(nèi)治療效果。
　　結(jié)果:40株耐藥性鮑曼不動桿菌顯示對大多數(shù)抗生素耐藥，包括含酶抑制劑和碳?xì)涿瓜╊?。通過脈沖場凝膠電泳可將細(xì)菌分為A、B、C共3個種克隆型，B型26(65％)株，為主要的克隆型。多位點(diǎn)序列分型中發(fā)現(xiàn)細(xì)菌共分13個ST型，以ST208為最原始ST型，

3、ST218、ST195、ST369、ST451、ST238、ST368、ST469均由ST208分化而來，共24株（占60％）。本研究成功分離出16株耐藥性鮑曼不動桿菌噬菌體，對40株菌的裂解覆蓋率達(dá)78％。選取一株噬菌體IME-AB2進(jìn)行研究，該株噬菌體滴度高達(dá)1011pfu/ml，可以快速吸附到宿主菌表面，潛伏期和爆發(fā)時間短，在LB培養(yǎng)基中可以4℃長期保存，反映出該株噬菌體裂解的高效能和穩(wěn)定性。電鏡觀察顯示這株噬菌頭部呈二十面體結(jié)構(gòu)

4、，含有尾部結(jié)構(gòu)，屬于肌尾噬菌體。噬菌體IME-AB2基因組是一條環(huán)狀的雙鏈DNA分子，全長43665bp，全基因組平均GC含量為37.5％，編碼82個蛋白質(zhì)基因。全基因組序列已在NCBI GenBank注冊(GenBank Accession number: JX976549)。該株噬菌體能在4小時內(nèi)使混濁菌液變澄清，并且能使器物表面的細(xì)菌數(shù)量明顯減少。在通過吸入治療小鼠肺炎的研究中，小鼠肺部接種細(xì)菌后30min，4h，24h給予噬菌體

5、治療，分別得到100％，50％，20％的生存率;以不同MOI(感染復(fù)數(shù))進(jìn)行治療，MOI=1時生存率100％，MOI=0.1時生存率80％，MOI=0.01時生存率60％，MOI=0.001時生存率50％，PBS組生存率只有10％。治療的小鼠肺泡灌洗液中的細(xì)菌明顯少于非治療組，噬菌體數(shù)量沒有明顯差異，小鼠肺臟病理結(jié)果顯示噬菌體療效顯著。
　　結(jié)論:噬菌體對耐藥性鮑曼不動桿菌具有良好的體內(nèi)、外抗菌作用，為臨床開發(fā)防治耐藥性鮑曼不動桿