微生物04-9179發(fā)酵液中生物活性成分的提取分離與結構鑒定及其上調CLA—1活性研究.pdf

1、動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是冠心病、中風以及外周血管病的主要病因。目前，人們對AS的產(chǎn)生機制的研究逐步深入，已證實與血脂代謝紊亂密切相關。資料表明高密度脂蛋白膽固醇(highdensitylipoproteincholesterol，HDL-C)濃度與心腦血管疾病發(fā)病率呈負相關。清道夫受體SR-B(scavengerreceptorclassB)是目前已闡明一級結構的脂蛋白受體中唯一確定能真正特異性介導細胞與高

2、密度脂蛋白(highdensitylipoprotein，HDL)作用的受體。SR-BI在機體脂類代謝調控中起作用，尤其重要的是它可通過促進膽固醇逆轉運(reversecholesteroltransport，RCT)來動員機體外周組織富余的膽固醇經(jīng)由HDL攜帶、轉運至肝臟或甾體激素合成組織，并最終被利用或排出體外。因此，SR-BI被認為是抗動脈粥樣硬化的潛在靶標。近年來以SR-BI作為靶點的抗動脈粥樣硬化藥物篩選模型開始建立，通過篩選

3、SR-BI基因表達上調劑有可能獲得抗AS的先導化合物。本課題組利用自建的CLA-1基因表達上調劑篩選模型，對本所微生物次級代謝產(chǎn)物庫(發(fā)酵液或粗提物)進行了大規(guī)模高通量篩選，獲得了多個陽性菌株。 本工作對陽性菌株04-9179大量發(fā)酵后，對其發(fā)酵液進行分離純化研究，從中分離出一個活性化合物9179A和兩個活性組分9179B、9179C。對陽性化合物9179A進行了結構確證，經(jīng)文獻檢索，確證9179A為一已知化合物，化學名7-(4

4、-(二甲氨基)苯基)-N-羥基-4,6-二甲基-7-氧-2,4-庚二烯酰胺。隨后利用人肝癌細胞HepG2對9179A上調CLA-1的作用進行了分子生物學驗證，確定其在mRNA水平和蛋白水平均能有效上調CLA-1的轉錄和表達。流式細胞儀分析結果也表明，人肝癌細胞HepG2經(jīng)9179A作用后，增加了細胞對熒光配基DiI-HDL的結合和攝取。隨后又利用PPAR激動劑篩選模型對9179A的作用機制進行了簡單的探討，實驗結果為陽性，初步表明PPA