川崎病急性期Th17細(xì)胞變化初探.pdf

1、目的：探討Th17/Treg細(xì)胞失衡在川崎病異常免疫反應(yīng)發(fā)病機(jī)制中的作用及Th17細(xì)胞在靜脈丙種球蛋白（IVIG）無(wú)反應(yīng)型川崎病免疫發(fā)病機(jī)制中的作用。方法：第一部分：我院為2007年2月～2009年2月住院川崎?。ň鶠镮VIG敏感型KD）患兒45例，正常同年齡對(duì)照20例。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血CD4+CD25+Foxp3high調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）及Th17細(xì)胞的表達(dá)。用CD4+T細(xì)胞免疫磁珠分離外周血CD4+T細(xì)胞，采用實(shí)時(shí)熒光定

2、量PCR（Realtime-PCR）檢測(cè)CD4+T細(xì)胞IL-17A/F、轉(zhuǎn)錄因子ROR-γt、Foxp3等mRNA變化；ELISA法檢測(cè)血清IL-17A、IL-6、IL-10、TGF-β、IL-23蛋白水平。KD患兒分別于靜脈丙種球蛋白（IVIG）治療前后（KD組和KDIVIG組）取血備檢。第二部分：我院2007年2月～2009年2月住院KD患兒45例，其中IVIG敏感型KD35例，IVIG無(wú)反應(yīng)型KD10例，同年齡對(duì)照組（Ctd組）2

3、0例。KD患兒分別于靜脈丙種球蛋白（IVIG）治療前后直接取血備檢，IVIG無(wú)反應(yīng)型KD再取三個(gè)時(shí)相取血備檢（分別在病程第8、9、11天取血）。采用熒光定量PCR（Real-timePCR）檢測(cè)CD4+T細(xì)胞IL-17A/F、轉(zhuǎn)錄因子ROR-γtmRNA表達(dá)；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血Th17細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞比例。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附方法（EUSA）檢測(cè)Th17細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子（IL-17A和IL-6）的表達(dá)。結(jié)果1：Th17/Treg

4、細(xì)胞失衡與急性期KD患兒的關(guān)系：（1）IL-17A/F表達(dá)與急性期KD患兒炎癥指標(biāo)正相關(guān)：比較分析急性期KD患兒IL-17A/IL-17FmRNA表達(dá)與血沉、CRP、WBC等炎癥反應(yīng)指標(biāo)的關(guān)系，注意到IL-17A/IL-17F與紅細(xì)胞沉降率（ESR）、C反應(yīng)蛋fl（CRP）、白細(xì)胞數(shù)（WBC）呈正相關(guān)關(guān)系（P<0.01）。（2）急性期KD患兒Th17/Treg細(xì)胞比值嚴(yán)重失衡：實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)急性期KD患兒外周血Th17細(xì)胞比例、轉(zhuǎn)錄因子R

5、OR-γtmRNA表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組（P<0.01）；Treg細(xì)胞比例、Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Foxp3表達(dá)明顯低于正常對(duì)照組（P<0.01）。急性期KD-CAL+患兒Th17細(xì)胞比例、ROR-γtmRNA水平明顯高于KD-CAL組（P<0.01）。Treg細(xì)胞比例及轉(zhuǎn)錄因子Foxp3表達(dá)則無(wú)明顯差異（P>0.05）。（3）急性期KD患兒治療前IL-17A、IL-23和11-6血濃度明顯高于對(duì)照組（P<0.01），KD-CA+患兒明顯

6、高于KD-CAL組（P<0.01）。TGF-β血濃度明顯低于對(duì)照組（P<0.01），KD-CAL+患兒和KD-CAL-組無(wú)明顯差異（P>0.05）。經(jīng)治療后IL-17A、IL-23及IL-6血濃度均有降低趨勢(shì)。TGF-β亦較前有升高趨勢(shì)。2：Th17細(xì)胞及其相關(guān)因子細(xì)胞與IVIG無(wú)反應(yīng)型KD的關(guān)系：（1）急性期KD患兒CD4+T細(xì)胞IL-17A/F表達(dá)明顯高于對(duì)照組（P<0.01）。（2）急性期IVIG無(wú)反應(yīng)型KD患兒CD4+T細(xì)胞內(nèi)I

7、L-17蛋白、IL-17A/FmRNA、Th-l7細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ROR-γt的基因表達(dá)明顯高于IVIG敏感型KD，經(jīng)IVIG治療后敏感型KDTh17細(xì)胞相關(guān)因子表達(dá)明顯降低（P<0.01），無(wú)反應(yīng)型KDTh17細(xì)胞相關(guān)因子仍持續(xù)高表達(dá)（P>0.05）。（3）急性期KD患兒治療前IL-17A和IL-6血濃度明顯高于對(duì)照組（P<0.01），其中IVIG無(wú)反應(yīng)型KD活化細(xì)胞因子水平明顯高于IVIG敏感型KD組（P<0.01）。經(jīng)治療后均有下降趨