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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
檢測(cè)胃癌患者癌組織和外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Th17相關(guān)細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)含量,分析Th17細(xì)胞及其相關(guān)因子在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用
方法:
1)66例胃癌患者,50例健康志愿者外周血和組織標(biāo)本均來自鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院,所有患者標(biāo)本的采集均記錄了就診時(shí)間、性別、年齡、病理組織分型等臨床病理資料,患者進(jìn)入研究前無任何放
2、療、化療以及其他藥物干預(yù);
2)分離外周血單個(gè)核細(xì)胞 PBMC(1×106/cells),應(yīng)用PMA(50 ng/ml)+Ionomycin(1μg/ml)+Monensin(500 ng/ml)刺激培養(yǎng)6 h。提取RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,采用qRT-PCR方法檢測(cè)外周血PBMC中CD4+T細(xì)胞主要轉(zhuǎn)錄因子RORγt、T-bet以及相關(guān)細(xì)胞因子IL-17A、IL-21、IL-1β、IFN-γ mRNA的表達(dá)水平;
3
3、)提取患者腫瘤組織中的RNA,應(yīng)用qRT-PCR方法檢測(cè)Th細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子和細(xì)胞因子IFN-γ, IL-17, T-bet和RORγt的mRNA表達(dá)水平,并通過直線相關(guān)分析方法對(duì)組織和外周血中細(xì)胞因子表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析;
4)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)胃癌患者血漿中IL-21和IL-1β水平。
結(jié)果:
1)與健康對(duì)照組比較,胃癌患者和胃癌轉(zhuǎn)移者外周血PBMC中Th17、Th1細(xì)胞相關(guān)的
4、轉(zhuǎn)錄因子RORγt與T-bet的表達(dá)均增高,但只有RORγt增高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。
2)與健康對(duì)照組相比胃癌患者和胃癌轉(zhuǎn)移者組織中,RORγt與T-bet的mRNA表達(dá)水平均增高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中 RORγt增加更加明顯,且在轉(zhuǎn)移組與原發(fā)組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05);
3)與健康對(duì)照組比較,胃癌患者血漿 IL-17表達(dá)增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但轉(zhuǎn)移組與原發(fā)組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
4)
5、腫瘤患者體內(nèi)TGF-β與IL-21mRNA與蛋白水平明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
5)IL-1β mRNA和蛋白水平呈高表達(dá),與健康對(duì)照組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),在胃癌轉(zhuǎn)移組和未轉(zhuǎn)移組之間也具有顯著差異(p<0.05)。
結(jié)論:
1)相對(duì)健康對(duì)照來說,胃癌和胃癌轉(zhuǎn)移患者PBMC與組織中Th17細(xì)胞及其相關(guān)的因子呈現(xiàn)高水平表達(dá),Th17與胃癌的轉(zhuǎn)移具有一定的相關(guān)性;
2)
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