川崎病急性期血清對培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞iNOS和MMP-9表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察KD患兒急性期血清對體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrixmetalloprotease-9，MMP-9)的影響，探討其在KD冠狀動脈損害機(jī)制中的作用。 方法： 1.標(biāo)本采集：分別收集30例川崎病患兒急性期(冠脈損害15例，冠脈正常15例)、15例年齡相仿的發(fā)熱患兒和15例年齡相仿的正常健康兒童外周血制

2、備血清。 2.細(xì)胞培養(yǎng)及分組：臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(humanumbilicalveinsendothelialcellsline，HUVEC)置于不同血清中培養(yǎng)，根據(jù)血清來源把HUVEC分組如下：(1)正常血清組(C組)；(2)發(fā)熱血清組(F組)；(3)KD冠脈無損害組(NAC組)；(4)KD冠脈損害組(AC組)。 3.指標(biāo)檢測：(1)硝酸還原法檢測細(xì)胞上清液NO濃度，NOS試劑盒檢測上清液總NOS、iNOS水平的變化；(

3、2)ELISA檢測細(xì)胞上清液MMP-9、TNF-α水平；(3)RT-PCR檢測培養(yǎng)后HUVECiNOSmRNA表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.實驗細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變：加入血清前，各組細(xì)胞均單層貼壁生長，多角形，透光性強(qiáng)，可見核及顆粒，呈鋪路石樣。加入血清24小時后，NAC組和AC組細(xì)胞數(shù)目減少，排列稀疏，胞間間隙明顯增寬，細(xì)胞活力下降。其余各組細(xì)胞形態(tài)無明顯變化。 2.AC組、NAC組NO、iNOS水平分別為875.87±9

4、2.32μmol/L、4.23±0.54μmol/L和717.91±24.31μmol/L、2.95±0.33μmol/L均明顯高于F組(依次為543.71±37.65μmol/L、1.84±0.26μmol/L)和C組(451.91±36.38μmol/L、0.81±0.21μmol/L)(P均＜0.05)，其中AC組升高更為明顯；F組與C組相比，有顯著性差異(P＜0.05)。 3.AC組、NAC組MMP-9、TNF-α濃度分

5、別為4.82+1.52ng/ml、30.97±3.75pg/ml和1.70±0.47ng/ml、24.79±1.53pg/ml顯著高于F組(依次為0.63±0.17ng/ml、10.98±2.46pg/ml)和C組(依次為0.45±0.14ng/ml、6.794±1.12pg/ml)(P均＜0.05)，AC組尤高，與NAC組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 4.AC組、NAC組與F組、C組相比，HUVECiNOSmRNA

6、表達(dá)顯著升高(P均＜0.05)，以AC組升高最為明顯；F組表達(dá)雖高于C組，但明顯低于AC組和NAC組，有顯著性差異(P＜0.05)。 5.相關(guān)分析結(jié)果：iNOS與NO、MMP-9和TNF-α之間存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.91、0.91、0.98，P＜0.01)；MMP-9和TNF-α之間存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.89，P＜0.01)。 結(jié)論： 1.KD冠脈損害患兒血清可誘導(dǎo)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)NO、iNOS及其mRNA