膽總管梗阻致急性膽囊炎與梗阻解除后膽囊病理，膽囊組織中NF-κB表達(dá)，血清及膽囊組織中IL-8、內(nèi)皮素變化的研究.pdf

1、目的：本試驗(yàn)采用家兔制備急性膽總管梗阻的動(dòng)物模型，通過(guò)觀察膽總管梗阻不同時(shí)期及解除膽總管梗阻后膽囊病理，膽囊組織中NF-κB的表達(dá)改變，血清及膽囊組織中IL-8、內(nèi)皮素(ET)的變化，為臨床上治療膽總管梗阻引起的急性膽囊炎提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。
　　 方法：選擇健康家兔54只，雌雄各半，體重2.2-2.5kg/只，隨機(jī)分為9組：正常對(duì)照組(N);膽總管梗阻組(B)：膽總管梗阻1天組(B1)，膽總管梗阻3天組(B3)，膽總管梗阻

2、5天組(B5)，膽總管梗阻7天組(B7)；膽總管梗阻解除組(R)：膽總管梗阻1天解除梗阻組(R1)，膽總管梗阻3天解除梗阻組(R3)，膽總管梗阻5天解除梗阻組(R5)，膽總管梗阻7天解除梗阻組(R7)，每組6只。每只家兔術(shù)前禁食過(guò)夜、自由飲水，以10％水合氯醛腹腔麻醉后，無(wú)菌操作下開(kāi)腹、游離膽總管下段。正常對(duì)照組膽總管分離完畢后關(guān)腹，手術(shù)后72小時(shí)處死動(dòng)物；膽總管梗阻及梗阻解除組均在直視下置入一外徑為2mm的細(xì)硅膠管，將硅膠管兩端經(jīng)皮下

3、隧道引出，腹壁引出處距正中切口1.5cm，提起并收緊硅膠管，直視下觀察以能阻止膽流為度，關(guān)腹并固定硅膠管。膽總管梗阻組分別于梗阻后1天、3大、5天、7天處死動(dòng)物，而膽總管梗阻解除組均于梗阻解除后72小時(shí)處死動(dòng)物。無(wú)菌心臟采血并離心分離血清，用放射免疫法測(cè)定血清中IL-8及內(nèi)皮素；各組采血并處死動(dòng)物后摘取整個(gè)膽囊，縱行剖取1/2研磨成勻漿，用放射免疫法測(cè)定膽囊組織中IL-8及內(nèi)皮素含量；其余膽囊組織置于10％中性甲醛中以備制石臘切片行HE

4、染色觀察膽囊病理形態(tài)及采用免疫組化方法觀察膽囊組織中NF-κB的表達(dá)情況。所有結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±S）表示，采用SPSS FOR WINDOW13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)和Student-Newman-Keuls方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 膽囊大體形態(tài)及病理：膽總管梗阻后膽囊出現(xiàn)急性炎癥。膽總管梗阻早期，B1

5、、B3組家兔膽囊較N組增大、膽囊壁增厚、水腫，但囊壁完整、未見(jiàn)潰瘍，膽汁為深黃色；鏡下粘膜上皮無(wú)缺損，固有層、肌層、漿膜層均有水腫，有血管擴(kuò)張充血及少量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，B5、B7組膽囊明顯增大，被膜緊張，膽囊底部粘膜可見(jiàn)潰瘍，嚴(yán)重者可見(jiàn)潰瘍穿孔，周?chē)纬砂懼鞚?，顏色加深，多為墨綠色；B7組膽囊內(nèi)可見(jiàn)小顆粒狀結(jié)石形成；鏡下B5組膽囊粘膜上皮部分脫落，血管明顯擴(kuò)張充血，粘膜層、固有層、肌層、漿膜層均可見(jiàn)大量中性粒

6、細(xì)胞彌漫性浸潤(rùn)，可有肌層斷裂、破壞；B7組粘膜上皮消失，見(jiàn)大量白細(xì)胞碎屑，肌層模糊不清。膽總管梗阻解除后膽囊炎癥較同時(shí)段膽總管梗阻組減輕。
　　 膽囊組織中NF-κB的表達(dá)：隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，膽囊組織中NFκB的表達(dá)逐漸增強(qiáng)，B7組可見(jiàn)大量核著色細(xì)胞，膽總管梗阻解除組與同時(shí)段膽總管梗阻組比較，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少，NF-κB的表達(dá)減弱。
　　 膽囊組織及血清中IL-8、內(nèi)皮素：隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)膽囊組織及血清中內(nèi)皮素、IL-

7、8的含量逐漸升高，膽總管梗阻組各組之間比較均有顯著性差異(P＜0.05)。膽總管梗阻解除組與同時(shí)段膽總管梗阻組比較，膽囊組織及血清中內(nèi)皮素、IL-8均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.膽總管梗阻導(dǎo)致急性膽囊炎癥，隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)膽囊組織炎癥逐漸加重，解除膽總管梗阻可減輕膽囊炎癥。
　　 2.隨著膽囊炎癥逐漸加重，膽囊組織中NF-κB的表達(dá)增強(qiáng)。NFκB作為重要的參與炎癥反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄

8、因子同樣與膽囊炎癥有著密切的關(guān)系。
　　 3.隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，膽囊炎癥逐漸加重，炎癥達(dá)到一定程度向全身發(fā)展，膽囊組織及血清中的IL-8含量逐漸增加，膽道梗阻解除后膽囊炎癥減輕，膽囊組織及血清中的IL-8含量減低。IL-8作為重要的細(xì)胞因子也可反映膽囊組織及全身炎癥反應(yīng)程度。
　　 4.膽囊組織及血清中內(nèi)皮素含量隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，含量明顯增加，膽總管梗阻解除后內(nèi)皮素含量減少，內(nèi)皮素作為重要的參與組織損傷的因子在膽總管