膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤的膽囊膽汁蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：建立人膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤的膽囊膽汁蛋白質(zhì)表達譜，通過定量蛋白質(zhì)組學(xué)、差異蛋白質(zhì)組學(xué)等方法研究膽囊癌與后兩種膽囊良性疾病差異表達的蛋白質(zhì)。
　　 方法：分別收集無污染的膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤患者的膽囊膽汁，經(jīng)去鹽去脂酶解后，二維色譜分離肽段，串聯(lián)質(zhì)譜分析肽段，最后檢索人蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫建立膽汁蛋白質(zhì)表達譜并同時行蛋白質(zhì)定量、功能及差異分析。另外收集膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤患者的膽囊組織石蠟標

2、本，通過免疫組織化學(xué)方法檢測膽囊良惡性組織中差異蛋白的表達水平。
　　 結(jié)果：⑴膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤患者的膽囊膽汁中共計鑒定出544種、495種和221種不同的蛋白質(zhì)，其中各有43種、28種和16種蛋白質(zhì)匹配兩條或以上的獨立肽段（多樣肽段匹配蛋白）。⑵膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤患者的膽囊膽汁中差異表達的多樣肽段匹配蛋白分別有30種、11種和7種。⑶對照已報道的正常膽囊、膽石癥、膽管上皮癌和胰腺癌的膽汁蛋白質(zhì)

3、譜，在膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤患者的膽囊膽汁中分別新鑒定出27種、21種和9種多樣肽段匹配蛋白。⑷S100A8蛋白在膽囊癌膽囊膽汁的三次重復(fù)實驗中分別匹配5條、2條和4條肽段，在慢性結(jié)石性膽囊炎組作為單肽段匹配蛋白測到兩次，而在膽囊腺瘤組三次重復(fù)實驗中未匹配任何肽段；另外，膽囊癌膽汁的S100A8蛋白質(zhì)定量指標蛋白豐度冪均值為6.01, 遠高于慢性結(jié)石性膽囊炎（0.49）和膽囊腺瘤（0.00）（多樣本秩和檢驗，p＜0.05）。

4、⑸S100A8蛋白表達于膽囊癌及慢性結(jié)石性膽囊炎組織中，前者的S100A8表達水平高于后者。膽囊癌中S100A8陽性細胞包括腫瘤浸潤的中性粒細胞、淋巴細胞等免疫細胞及癌細胞，以前者為著。S100A8陽性細胞數(shù)在42份膽囊癌、21份慢性結(jié)石性膽囊炎及20份膽囊腺瘤組織標本200×顯微鏡下中位數(shù)分別為62.5、8和5，膽囊癌的S100A8陽性細胞數(shù)多于后兩者且有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（多樣本秩和檢驗，p＜0.01），但S100A8表達與膽囊癌患者的

5、年齡、性別及腫瘤分化、分期和病理類型無明顯相關(guān)（卡方檢驗，p＞0.05）。
　　 結(jié)論：①運用大規(guī)模二維色譜/串聯(lián)質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法成功建立了人膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤的膽囊膽汁蛋白質(zhì)表達譜。②膽囊良惡性疾病差異蛋白質(zhì)的確立為深入研究膽囊癌變的分子機制、分子標志物及分子靶向治療等奠定了基礎(chǔ)。③膽汁的差異蛋白質(zhì)組學(xué)和定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究表明，膽囊癌患者S100A8蛋白表達水平高于慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤。④膽囊癌組

6、織中浸潤了大量中性粒細胞、淋巴細胞等炎性免疫細胞，這符合了炎癥相關(guān)性腫瘤的特性。⑤S100A8蛋白表達于膽囊癌及慢性結(jié)石性膽囊炎組織中，前者的S100A8表達水平高于后者。膽囊癌中S100A8陽性細胞包括腫瘤浸潤的中性粒細胞、淋巴細胞等免疫細胞及癌細胞，以前者為著，提示S100A8在膽囊癌這一炎癥相關(guān)性癌癥的發(fā)生過程中起重要作用。 S100A8和NF-kappa B在膽囊癌的表達水平一致較慢性膽囊炎高，S100A8可能通過NF-kapp