人乳頭瘤病毒假病毒中和模型的建立和應用.pdf

1、人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)感染能引起宮頸癌、生殖器疣等多種性傳播疾病，嚴重危害著人類健康。由于HPV的生活周期依賴于上皮細胞的分化，傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)方法不能實現(xiàn)HPV的擴增，同時從病人組織中分離的病毒也極其有限，這制約了HPV的分子生物學研究和HPV疫苗的保護性評價。研究人員已經(jīng)發(fā)展出多種系統(tǒng)以克服病毒來源不足的限制：通過組織移植和筏式組織培養(yǎng)擴增一些HPV型的病毒，以及用重組痘病毒、腺病毒、酵母表達構(gòu)

2、建HPV假病毒。但是這些病毒/假病毒生產(chǎn)方法的操作較復雜，效率均不高，無法滿足大量試驗的需要。 本論文利用HPV研究方面的新進展，結(jié)合本研究中心的實際條件，用磷酸鈣轉(zhuǎn)染方法將含HPV優(yōu)化基因的質(zhì)粒和報告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，成功構(gòu)建獲得了高滴度的感染性HPV16、HPV18、HPV6和HPV11四種假病毒，電鏡觀察證實獲得的假病毒具有與天然病毒相同的形態(tài)，隨后用標準中和單抗進行的鑒定證實假病毒具有與天然病毒相似的感染性。這些結(jié)果說明獲得的

3、假病毒可以替代天然病毒用于HPV生物學研究和HPV候選疫苗的保護性評價。 我們用獲得的四種假病毒對29種哺乳動物細胞進行了感染比較。發(fā)現(xiàn)HPV16和HPV18假病毒有很廣的細胞嗜性，能感染人、嚙齒動物和猴不同組織的多種細胞系；HPV6和HPV11假病毒能感染人的多種細胞系，但是基本不感染嚙齒動物和猴的細胞。該結(jié)果暗示“高?！毙虷PV和“低危”型HPV對細胞的感染機制可能不同?；诙嗉毎腥窘Y(jié)果，我們選擇293FT細胞作為假病毒感

4、染靶細胞，建立了假病毒中和模型。 本實驗室已經(jīng)篩選獲得了HPV16、HPV18和HPV6的單抗各幾十株，我們用假病毒感染中和試驗從中鑒定出17株HPV16中和單抗、9株HPV18中和單抗和22株HPV6中和單抗。滴度最高的16株HPV6中和單抗有12株能阻斷HPV11假病毒的感染，其中5株單抗對HPV11假病毒的中和滴度能達到104以上，表明HPV6和HPV11具有共同的中和表位。鑒定出的這些中和單抗對于全面鑒定HPV中和表位和

5、HPV疫苗質(zhì)控均有較大的幫助。 另外，用假病毒中和模型對本實驗室研發(fā)的HPV16、HPV18和HPV6VLP候選疫苗的免疫保護性進行了鑒定。中和試驗結(jié)果表明，HPV16、HPV18、HPV6VLP在小鼠、家兔和山羊中均能誘導出很強的中和抗體應答，具有很好的疫苗應用前景。尤其值得注意的是，兔和山羊的HPV6VLP免疫血清能有效阻斷HPV11假病毒的感染，提示該HPV6VLP候選疫苗可能對HPV11也具有交叉保護性。我們進一步用不同