一種引起肉仔雞免疫和生長(zhǎng)抑制病的新病毒的初步鑒定及免疫檢測(cè)方法的建立.pdf

1、雞免疫和生長(zhǎng)抑制病病毒是近年來(lái)嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的一種新的疾病。我們從發(fā)生免疫和生長(zhǎng)抑制病的肉仔雞中分離到了一種新的病毒，對(duì)其生物學(xué)特性、理化特性、形態(tài)特性等方面進(jìn)行了初步鑒定，并建立了間接ELISA和間接IFA檢測(cè)方法。 1.負(fù)染法電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，人工感染的SPF雞胚尿囊液中有直徑為40-70nm的病毒粒子存在，呈不規(guī)則的六邊形，近似圓形或橢圓形，有3～5nm纖突。人工感染的SPF雞胚和雞的腺胃、小腸、肝臟和腎臟超薄切片電鏡也發(fā)現(xiàn)組

2、織細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)有類(lèi)似病毒粒子。 2.病毒生物學(xué)特性試驗(yàn)表明，該病毒為RNA病毒，通過(guò)尿囊腔接種，可在10日齡SPF雞胚上生長(zhǎng)，接種后3-5天可引起雞胚規(guī)律性死亡，病毒在10日齡SPF雞胚上增殖的高峰為接種后72h。用Vero細(xì)胞、PK15和雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)進(jìn)行適應(yīng)性培養(yǎng)，未能成功。3.理化特性試驗(yàn)結(jié)果表明，該病毒對(duì)20％乙醚有較強(qiáng)的耐受性，對(duì)4.8％氯仿有一定的耐受性，初步說(shuō)明該病毒無(wú)囊摸。在pH4～10范圍內(nèi)37℃2

3、h病毒完全耐受。在酸性(pH3.0)環(huán)境中37℃2h，仍有病毒能存活；在堿性(pH11.0)環(huán)境中37℃2h病毒完全滅活；在60℃下30min病毒完全滅活，而56℃下30min病毒仍有耐受性。 4.制備出了兔抗雞免疫和生長(zhǎng)抑制病毒免疫血清。經(jīng)病毒中和試驗(yàn)和瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，表明該病毒存在中和抗原，而無(wú)瓊擴(kuò)抗原。制備的兔抗雞免疫和生長(zhǎng)抑制病病毒免疫血清的中和效價(jià)PD50為1/104。 5.利用自制的陽(yáng)性兔抗雞免疫和生長(zhǎng)抑制病病

4、毒免疫血清，在實(shí)驗(yàn)室條件下建立起了間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(間接ELISA)和間接免疫熒光法(IFA)兩種免疫檢測(cè)方法。間接ELISA法的最佳反應(yīng)條件為包被抗原的最佳稀釋度為1：100，酶標(biāo)二抗的最佳稀釋度為1:1000，底物最佳反應(yīng)時(shí)間為30分鐘。間接免疫熒光(IFA)的最佳反應(yīng)條件為兔抗該病毒免疫血清的最佳稀釋度為1：10，羊抗兔IgG-FITC熒光二抗最佳稀釋度為1：100，感作時(shí)間為45min。經(jīng)特異性和重復(fù)性試驗(yàn)，表明兩種方法均