血清肌鈣蛋白-Ⅰ均相化學(xué)發(fā)光免疫檢測體系的初步建立.pdf

1、急性心肌梗死(AMI)作為急性冠狀動(dòng)脈綜合征(ACS)最嚴(yán)重的類型，是威脅人類健康的殺手，可致心源性猝死。根據(jù)心電圖的改變，可分為ST段抬高型急性心肌梗死(STEMI)和非ST段抬高型急性心肌梗死(NSTEMI): STEMI有特征性的心電圖改變，便于病人早發(fā)現(xiàn)、早治療，患者的預(yù)后較好;而NSTEMI沒有特征性的心電圖改變，此時(shí)心肌標(biāo)志物的檢測對NSTEMI早期診斷和治療顯得尤為重要。心肌肌鈣蛋白I(cTnⅠ)對心肌損傷具有高度的敏感性

2、和特異性，已成為診斷AMI診斷首選心臟標(biāo)志物，并作為評價(jià)心肌壞死和診斷心肌梗死的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
　　TnI是心肌主要收縮蛋白的三個(gè)亞單位之一，是肌原纖維ATP酶的抑制性亞單位，分為3種亞型:快骨骼肌亞型(fTnI)、慢骨骼肌亞型(sTnI)和心肌亞型(cTnⅠ)。心肌亞型與其他亞型有約40％的異源性，在氨基端延伸出一段31個(gè)氨基酸組成的序列，利用此特性，可提高cTnⅠ診斷AMI的特異性和準(zhǔn)確性。cTnⅠ經(jīng)歷了常規(guī)方法檢測到高敏感方法

3、檢測幾代檢測方法的改進(jìn)和臨床應(yīng)用研究，高敏cTnⅠ(hs-cTnⅠ)在臨床上得到廣泛的認(rèn)同和應(yīng)用。本研究以魯米諾氧通道免疫分析技術(shù)(LOCI)為基礎(chǔ)，建立一種新的檢測cTnⅠ的定量方法，該方法具有靈敏度高、均相、免清洗、快速簡便等優(yōu)點(diǎn)。
　　目的:
　　以魯米諾氧通道免疫分析技術(shù)(LOCI)為基礎(chǔ)，以AlphaScreen均相發(fā)光免疫分析技術(shù)為平臺，初步建立血清肌鈣蛋白-Ⅰ(cTnⅠ)均相化學(xué)發(fā)光免疫檢測體系，并對其進(jìn)行方法

4、學(xué)和臨床評價(jià)。
　　方法:
　　鼠抗人cTnⅠ單克隆抗體、兔抗人cTnⅠ多克隆抗體分別標(biāo)記受體微球、生物素，組成兩對抗體組合，采用棋盤滴定法確定較佳抗體組合;并利用棋盤滴定法確定標(biāo)記受體微球和生物素化抗體反應(yīng)的最適工作濃度，同時(shí)對實(shí)驗(yàn)不同階段反應(yīng)時(shí)間、試劑加樣順序、加樣比例以及方法的緩沖體系進(jìn)行了優(yōu)化。在優(yōu)化基礎(chǔ)上建立四參數(shù)擬合方程的校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線，測定未知濃度臨床標(biāo)本，得到其發(fā)光信號值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得出其相應(yīng)的cT

5、nⅠ濃度。根據(jù)上述方法對臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測并做方法學(xué)及臨床評價(jià)。研究中采用ELISA Calc軟件進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:
　　本法建立的測定cTnⅠ均相免疫檢測體系是由兔抗人cTnⅠ多克隆抗體包被受體微球、生物素標(biāo)記鼠抗人cTnⅠ單克隆抗體及鏈霉親和素包被供體微球共同組成，該方法快速、敏感，檢測時(shí)間為17.5 min;分析靈敏度為0.045 ng/mL，功能靈敏度為0.053 ng/mL;回收率為104.97％-108

6、.12％;批內(nèi)精密度為3.88％-5.53％，批間精密度為7.60％-8.75％;特異性分析中溶血、黃疸及脂血的干擾率均＜10％;采用本方法檢測87例健康人cTnⅠ含量，上限為1.05 ng/mL;檢測40份臨床標(biāo)本結(jié)果與直接化學(xué)發(fā)光檢測法所得結(jié)果具有良好的相關(guān)性(r2=0.979)，使用x2檢驗(yàn)及一致性分析推斷本試劑與直接化學(xué)發(fā)光檢測試劑無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　本研究建立的方法能夠用于定量檢測血清cTnⅠ，該方法具